• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        DEAE-Affi-Gel Blue层析法分级分离IgG

        相关实验:从抗血清、腹水或杂交瘤上清液中纯化免疫球蛋白 G 组分

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1)根据制造商的说明准备DEAE-Aff1-Gel Blue柱子。于4℃用5倍柱床体积的加样缓 冲液平衡(7 mL柱床体积/mL抗血清或腹水)。


        2)于4℃下透析含1g的样品40 h,中间换2次加样缓冲液(每次换大约4 L)


        3)加样上柱,速度为10 mL/h。以同样的速度用3倍柱床体积的加样缓冲液洗脱未结 合的蛋白质。


        4)用洗脱缓冲液以10 mL/h的速度洗脱结合的1gG组分。以10 mL为一组分分部收集 洗脱液,并储存于4℃,直至合并各组分。


        5) 每组分取30〜50 μl,用10% SDS-PAGE在还原条件下分析,检测含1gG 的组分。


        在还原条件下,IgG的重轻链将分开,相应的分子质量分别为50 OOO Da和25 OOO Da。


        在这一步可测定污染的转铁蛋白的量,可用凝胶过滤层析法除去。


        6) 合并含有IgG的组分,在4℃下透析大于40 h,期间换2次所需缓冲液(每次换 4 L)


        7) 用5倍柱床体积的加样缓冲液重新平衡DEAE-Aff1-Gel Blue柱,加少许NaN3晶体阻止细菌生长,储存于4℃。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序