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        方案13 用 SYPRO Ruby 进行荧光染色

        相关实验:固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.将胶放入聚丙烯塑料平皿中,其中应有足够的固定溶液,使凝胶在平皿中能自由漂浮。在摇床上摇动 30 min。

        如果是多块凝胶同时被固定,应在不同的平皿中染色。

        2.从平皿中倒出固定液,在平皿中用方形塑料纸或聚碳酸酯薄片支持凝胶。不要用带手套的手接触凝胶。将凝胶放在 SYPRORuby 溶液中染色 90 min,放置^往复式或定轨式摇床,黑暗中温育过夜。

        标准大小的凝胶所需染色液的最小体积如下:
        方案13 用 SYPRO Ruby 进行荧光染色

        如染色液太少,会降低敏感度。伴随染色时间的延长,敏感度会升高。染色少于 3 h 可获得最大敏感度。如果继续染色,将会大大降低敏感度。

        3.(可选)弃去 SYPRORuby 染色液。如有残留染料会导致较高的荧光背景。

        为了将残留染料除去,将凝胶放在一定体积的固定液中(体积相当于步骤②中染料体积),在摇床上摇动 30 min。

        4.用 300nm 蓝光透射仪或激光扫描仪呈现蛋白。SYPRORuby 的最大激发波长是 300nm 和 420nm,最大发射波长是 618nm。

        一些预制凝胶的聚酯化背面对荧光是高度敏感的,此时应用 UV 透射仪。将聚丙烯酰胺凝胶颠倒,用一个发射过滤器来屏蔽蓝色荧光。蓝光透射仪或激光扫描仪的使用将会减少塑料背面的荧光数量。这种染料和目胃系统相适合。图像系统在 450nm、473nm、488nm、532nm 都有激光发射。目前,激光扫描仪的最大供应商也能提供选择过滤这种染料的装置。

        来源:丁香实验

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