原理
肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。
材料与仪器
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 |
步骤
1.取一些肝放入研钵中，如果事先没有被冰冻，可用液氮充满研钵来保持肝冰冻。用研杵将肝破碎成小块。
2.称量冰冻肝的小块 10~40 mg，将其转移至在冰上放置的离心小管中。操作应迅速以尽可能减少肝样品的解冻。将剩余的肝储存在一 80°C。
3.在有肝样品的离心管中，每 40 mg 肝加入 1ml 冷的抽提溶液。每 1ml 抽提溶液加 100 mmol/L PMSF。
4.用小研杵（其大小适合在离心管中使用）磨碎肝样品。
5.每 1ml 抽提物中加 50ul 1.2mol/L DTT，振荡。
6.在 4°C 对样品进行最大速度离心，lOmin。
7.检测上清的蛋白质浓度。
8.将上清分成每 100ul —份。若不立即用于 IEF，将其储存在一 80°C(样品只能冻融一次，以避免多次冻融造成的不利影响）。
9.按照方案 5 进行第一向 IEF。
进行第一向 IEF 时，以鼠肝为例，浓度应为 5~lOmg/ml。对第一向 IEF，样品可在包含 7mol/L 脲、2mol/L 硫脲、20 g/LASB-14 的水化液中被稀释成准确浓度。但是，若在水化的同时上样，IEF 胶条可负载相当大体积的样品。最适水化溶液可根据蛋白质来源和经验而灵活决定。
来源：丁香实验
