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        准备供体材料

        相关实验:基因枪法转化小麦实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法,幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种,幼穗转化比幼胚盾片转化更有效,如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier,以及其他小麦亚族 Triticeae;硬粒小麦品种 T.turgidum ssp 和小大麦(见注 23 和注 24 )。

        1. 收集和消毒小麦颖果

        ( 1 ) 收集温室生长 10~12 周的小麦穗(见注 25 ) 。

        ( 2 ) 从穗中剥出颖果(见注 26)。

        ( 3 ) 用 70% 乙醇将小麦颖果灭菌 5 min,然后用 10% 漂白消毒剂浸泡 15~20 min,中间晃动几次。

        ( 4 ) 用灭菌水至少洗三次。保持灭菌后颖果的湿度,但是不要浸泡在水中。

        2. 分离和预培养幼胚盾片

        ( 1 ) 在无菌环境中,显微镜下分离幼胚 [ 图 4 .1 ( a ) ] 并且切除胚轴以防止萌发(见注 2 7 )。

        准备供体材料

        ( 2 )  将 25~30 个盾片放置在包含诱导培养基(MS9% 0.5 DAg)、直径 9 cm 的培养皿的中间区域,将胚的切面放置在培养基上,即完整的盾片作为轰击面 [见注 28 , 图 4.1 (b ) ]。

        ( 3 )  使用封口膜 Nescofilm   (Fisher  Scientific  UK) 封好平板,轰击前将培养皿放在 22℃ 黑暗条件下预培养 1~2 天(见注 29) 。

        来源:丁香实验

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