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        基因枪法转化小麦实验

        实验分类:

        植物学实验

        最新修订时间:

        简介

        这里介绍一个完整而详细的获得转基因小麦的指导方法,这个方法使用基因枪将质粒 DNA 转移到小麦幼胚中,通过体细胞胚胎发生获得转基因植株。这也是目前小麦遗传转化最常用的方法之一,且具有较多的优点。不过,近年来随着一些更简便的小麦转化方法的逐步发展与完善。本实验来源「麦类作物转基因技术与田间鉴定实验指南」〔英〕H.D.琼斯  P.R .休里 主编。

        来源:丁香实验

        操作方法

        准备供体材料

        下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法,幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种,幼穗转化比幼胚盾片转化更有效,如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier,以及其他小麦亚族 Triticeae;硬粒小麦品种 T.turgidum ssp 和小大麦(见注 23 和注 24 )。 1. 收集和消毒小麦颖果 ( 1 ) 收集温室生长 10~12 周

        DNA包裹金粉颗粒

        1. 准备金粉颗粒 ( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉(0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中,加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min,短暂离心 3s,然后弃上清。重复用乙醇洗两遍。 ( 2 ) 加入 1 ml 无菌水,超声波处理 2 min,短暂离心 3s, 然后弃上清。重复一次。 (3 ) 加入 1 ml 无菌水,涡旋振荡重悬。每 50 μl 分装到 1

        使用 PDS-1000/He 基因枪轰击

        注意:由于基因枪通过高压使粒子加速到极高的速度,故操作基因枪时应采取适当的安全措施并且佩戴安全眼镜。 在任何使用基因枪转化的实验中,必须设置对照检测分化和选择效率(见注 40) 。 ( 1 ) 根据 PDS-1000/He (见图 4.2 ) 基因枪操作指南操作,将 DNA 包埋的金粉 ( 见第 3.2 节步骤 2 ) 转到组织中。下面的参数是按照标准设置的(见注 41) 。距离 2.5 cm

        轰击后未成熟盾片培养

        1. 诱导愈伤 ( 1 ) 基因枪轰击后,将盾片分散转移,每个重复分到 2~3 个含诱导培养基(MS9% 0.5 Dag) 的平皿中,大约 10 个盾片一皿(见注 48)。 ( 2 ) 用封口膜封好平皿,放在 22℃ 黑暗培养诱导愈伤 [见注 4 9 和注 50 ,图 4.1(c) ]。 2. 分化和选择 ( 1 ) 在诱导培养基上生长 3~5 周后,将含有体细胞胚的愈伤组织转移到含有分化

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