材料与仪器
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 |
步骤
1. 准备金粉颗粒
( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中，加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min，短暂离心 3s，然后弃上清。重复用乙醇洗两遍。
( 2 ) 加入 1 ml 无菌水，超声波处理 2 min，短暂离心 3s， 然后弃上清。重复一次。
(3 ) 加入 1 ml 无菌水，涡旋振荡重悬。每 50 μl 分装到 1.5 ml 离心管，每次分装前用涡旋振荡混匀，确保金粉均匀分布。分装好后 -20℃ 储存。
2. DNA 包裹金粉颗粒
下面的操作步骤最好在冰上无菌环境中操作。
( 1 ) 取出分装的 50 μl 金粉悬浮液室温融化（见第 3.2 节步骤 1 )，超声波处理 1~2 min (见注 30 ) 。然后涡旋混匀确保完全重悬，特别是需要进一步分装更小体积时更需注意（见注 31 ) 。
( 2 ) 加入 5 μl DNA (TE 缓冲液或者水溶解的 1 mg/ml DNA) (见注 32 ) 或者水(见注 33) ，涡旋振荡使 DNA 与金粉充分接触（见注 34)。
( 3 ) 在离心管盖加入 50 μl 2.5 mol/L CaCl2 和 20 μl 0.1 mol/L 亚精胺（见注 35 ) ，混匀后再加入离心管内。涡旋混匀，高速短暂离心 3~5 s，沉淀金粉-DNA 复合体。弃上清。
( 4 ) 加入 150 μl 无水乙醇漂洗金粉-DNA 复合体颗粒，使颗粒充分重悬（见 注 36 和注 37)。高速短暂离心 3~5 s，沉淀金粉-DNA 复合体。弃上清。
( 5 ) 最后悬浮于 85 μl 乙醇中，放在冰上待用（见注 38)。
( 1 ) 称取 20 m BIO-RAD 亚微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 离心管中，加入 1 ml 无水乙醇。超声波处理 2 min，短暂离心 3s，然后弃上清。重复用乙醇洗两遍。
( 2 ) 加入 1 ml 无菌水，超声波处理 2 min，短暂离心 3s， 然后弃上清。重复一次。
(3 ) 加入 1 ml 无菌水，涡旋振荡重悬。每 50 μl 分装到 1.5 ml 离心管，每次分装前用涡旋振荡混匀，确保金粉均匀分布。分装好后 -20℃ 储存。
2. DNA 包裹金粉颗粒
下面的操作步骤最好在冰上无菌环境中操作。
( 1 ) 取出分装的 50 μl 金粉悬浮液室温融化（见第 3.2 节步骤 1 )，超声波处理 1~2 min (见注 30 ) 。然后涡旋混匀确保完全重悬，特别是需要进一步分装更小体积时更需注意（见注 31 ) 。
( 2 ) 加入 5 μl DNA (TE 缓冲液或者水溶解的 1 mg/ml DNA) (见注 32 ) 或者水(见注 33) ，涡旋振荡使 DNA 与金粉充分接触（见注 34)。
( 3 ) 在离心管盖加入 50 μl 2.5 mol/L CaCl2 和 20 μl 0.1 mol/L 亚精胺（见注 35 ) ，混匀后再加入离心管内。涡旋混匀，高速短暂离心 3~5 s，沉淀金粉-DNA 复合体。弃上清。
( 4 ) 加入 150 μl 无水乙醇漂洗金粉-DNA 复合体颗粒，使颗粒充分重悬（见 注 36 和注 37)。高速短暂离心 3~5 s，沉淀金粉-DNA 复合体。弃上清。
( 5 ) 最后悬浮于 85 μl 乙醇中，放在冰上待用（见注 38)。
来源：丁香实验
