• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        反向高效液相层析绘制多肽图谱

        相关实验:胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 加样前。做一次模拟加样,进行整个程序的洗脱,测 OD 初始值。记录所有实验变量:加样量、溶剂梯度、流速、吸收范围等。

        2. 制备 32P 标记的胰蛋白酶切样品(需要几千 cpm 才能有效地检测到 32P 标记的多肽 )。用 0.1% TFA 悬浮样品,10000 g 离心 5 分钟使溶液澄清。如果多肽样品难以溶解,可以加入溶于 0.1% TFA 的 5 mol/L 尿素或盐酸胍。离心使溶液澄清,于加样前加 10 倍的 0.1% TFA,混合,立即加样开始层析。

        3. 通过内径为 0.1 mm 的 50 cm 管将分步收集装置连到流出槽的出口,以 1 分钟为单位收集样品。

        4. 通过测定 214 nm 处的光吸收监测多肽的洗脱。未标记多肽要在 214 nm 被检测到至少需要 10 pmol/L。

        5. 鉴定含有 32P 标记的多肽的组分。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序