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        鼠胚原代细胞培养

        相关实验:原代细胞培养-小鼠胚胎分离实验

        最新修订时间:

        原理

        原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物体内取出所需的组织(或器官),经胰酶消化,分散成为单个游离的细胞,在人工条件下培养,使其不断地生长及繁殖。

        材料与仪器

        步骤

        1. 取材:取怀孕母鼠,颈椎脱臼法处死后,整个鼠体侵入盛有纯酒精的烧杯中浸泡1分钟。取出母鼠在不锈钢手术盘中用无菌手术剪打开腹腔,取出鼠胚,放入无菌培养皿内。注意取材可在无菌操作台外操作。


        2. 用70%酒精擦拭装有鼠胚的培养皿外周后,将培养皿移至超净工作台上,用含双抗的Hanks液洗涤鼠胚数遍去除血污。用无菌手术器械去除头、尾和四肢及内脏,余下组织用剪刀剪碎后,再用含双抗的Hanks液洗涤数次。最后用含血清的细胞培养液清洗。


        3. 把组织块剪成1 mm3左右大小于培养液中,用无菌胶头吸管吸取组织块,注意要吸在专用的细胞长吸管前端细长部位,如吸得过高,可使组织小块黏附于管壁而无法吹出。组织块应均匀贴附于细胞培养瓶的底部,注意组织块间要留有空间,不要太密。


        4. 翻转培养瓶,使贴附组织块的细胞培养面朝上,在培养瓶底加入细胞培养液3——5ml,不要加的太多以免培养液漏出产生污染。旋好瓶盖后在培养瓶侧用油性笔写上培养时间。细胞培养放于CO2恒温培养箱中,温度为37℃,CO2浓度为5%,完全湿度条件下进行培养,以利组织块贴附。


        5. 2-3小时后,可见组织小块略干燥,牢固贴在瓶壁时,再慢慢翻转培养瓶,使细胞培养液缓慢浸泡组织块,继续培养。操作过程中,动作一定要轻缓,以免贴附在瓶壁上的组织块脱落,影响贴壁培养。然后将培养瓶置于37℃培养箱培养2-3天。


        注意事项

        1. 培养液和培养物的比例:一定浓度的培养物仅能支持一定数量的细胞生长,不能盲目增加每单位体积的细胞浓度。


        2. pH:初培养pH应为7.4,培养过程中应不低于7.0。


        3. 培养瓶内的空间:一般培养瓶内培养液与液面上的空间体积之比为1:10。


        来源:丁香实验

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