• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        原代细胞培养技术

        互联网

        5069

        一、组织块直接培养法

        1、取材,用Hank's液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。

        2、用手术剪将组织剪切成1mm3 左右的小块,再用Hank's液洗三次。

        3、将组织块转移至培养瓶,并贴附于瓶底面。

        4、轻轻将培养瓶翻转,瓶底朝上,向瓶内注入适量的培养液,将培养瓶放置在37℃恒温箱内培养。

        5、放置待组织小块贴附后,将培养瓶慢慢翻转平放,使组织浸入培养液中(勿使组织漂起),37℃继续培养。

        二、消化培养法

        1、取材,用Hank's液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。

        2、用手术剪将组织剪切成1mm3 左右的小块,再用Hank's液洗三次。

        3、视组织块量加入酶液,37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。

        4、加入3—5ml培养液以终止酶消化作用(或加入相关酶抑制剂)。

        5、静置5—10分钟,使未分散的组织块下沉,取悬液加入到离心管中。

        6、1000rpm,离心10分钟,弃上清液。

        7、加入Hank's液5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。

        8、加入培养液1—2ml(视细胞量),血球计数板计数。

        9、将细胞转移到培养瓶中,37℃下培养。

        三、 器官培养

        1、将不锈网做成支架形状,调整其高度至培养皿的1/2深度平面,在其表面放置0.5μm孔径滤膜。

        2、将培养液加入培养皿中,使液面刚刚接触到滤膜,但不要使其浮起。

        3、将要培养器官组织放在滤膜上,一般厚度不要超过200μm,水平面积不超过10mm2 。

        4、将上述准备好的培养物放入CO2 培养箱,并加注氧气调整氧分压,最好到90%。

        5、培养过程中要注意观察培养液平面,尽可能保持在与滤膜一致的水平上。

        6、上述可进行器官培养1-3周,每2-3天换液一次,并根据情况做进一步实验和检测。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序