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文献和实验,使细胞密度达5×105个/m1。然后用等体积的CHO-S-sFM1I 将细胞稀释到3x 105个/ml,继续培养,重复上述操作,直至血清浓度降为0.1%后,用完全无血清培养基培养到3×106个/ml。再以3×l05个/ml接种,传50代,至此完成适应工作。(3)细胞计数参阅《组织培养技术4》的方法,用血球计数板计数。(4)CHO细胞表达EPO水平应用MIT比色法测定。4、无血清培养基的发展目前的无血清培养基已进入第三代,第一代无血清培养基虽然不含有血清,但含有大量的动物或植物蛋白,如BSA或激素
生长。目前常用的CHO细胞包括原始CHO和二氢叶酸还原酶双倍体基因缺失型(DHFR-)突变株CHO。近年来,为降低生产成本和减少血制品带来的潜在危害性,动物细胞生产开始使用无血清培养基(SFM),但SFM往往导致细胞活力差,贴壁性差,分泌外源蛋白的能力差等缺点。另有研究者尝 试将类胰岛素生长因子IGF基因和转铁蛋白基因转入CHO细胞获得能自身分泌必需蛋白的“超级CHO”,无需在培养基中转铁蛋白和胰岛素,细胞可在SFM中生长良好。与其他表达系统相比,CHO表达系统具有以下的优点:(1)具有准确的转录后修饰
CHO细胞表达系统与毕赤酵母表达系统是当前发展前景看好的两个表达系统,为了能够更加直观地对两个表达系统有一定的认识,特意在此篇中对两个表达系统作一定的比较,从而能够更进一步的对两个表达系统有更深的了解一、CHO细胞表达系统1、优点CHO细胞属于成纤维细胞,既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。目前常用的CHO细胞包括原始CHO和二氢叶酸还原酶双倍体基因缺失型(DHFR-)突变株CHO。近年来,为降低生产成本和减少血制品带来的潜在危害性,动物细胞生产开始使用无血清培养基(SFM),但SFM往往导致细胞
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