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        0.3%H2O2-80%甲醇室温孵育这一步,是将两个试剂混合加入后孵育吗?

        相关实验:免疫酶标技术

        user-title

        acejandro本尊

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        2 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        是,用甲醇配置H2O2,到0.3%,加入孵育。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        不是的。

        3%H2O2室温孵育5~10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。
        蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟,(如需采用抗原修复,可在此步后进行)。
        5~10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭,室温孵育10分钟。倾去血清,勿洗,滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小时或4℃过夜。
        PBS冲洗,5分钟×3次。
        滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS稀释),37℃孵育10~30分钟;或滴加第二代生物素标记二抗工作液,37℃或室温孵育10~30分钟。
        PBS冲洗,5分钟×3次。
        滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS稀释),37℃孵育10~30分钟;或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃或室温孵育10~30分钟。
        PBS冲洗,5分钟×3次。
        显色剂显色(DAB或AEC)。
        自来水充分冲洗,复染,封片。

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