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        电转化法

        相关实验:质粒的转化及转化子的鉴定实验

        最新修订时间:

        原理

        电转化法:外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定,形成电穿孔,不仅有利于离子和水进入细菌细胞,也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。

        材料与仪器

        步骤

        1.  l ml X-gal (20 mg/ml),25 ml Amp(100 mg/ml),250 ml 制备选择性培养基平板:在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200mg/ml),混匀后倒入灭菌培养皿中;

        2.  取出制备好的感受态细胞,放在冰上融化;

        3.  连接产物,用移液器轻轻吸打均匀,置冰上;每管感受态细胞加入1 μl

        4.  电转化仪选择1800 V作为输出电压;

        5.  将要转化的混合物加入预冷的1 mm的电转化杯中,立即按下按纽电击;

        6.  立即加1 ml SOC培养基到转化杯中重悬细胞;

        7.  将细胞转入合适的培养管中37 ℃培养1小时;

        8.  吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板;

        9.  37 ℃培养过夜,观察结果。

        来源:丁香实验

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