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        辣根过氧化物酶法检测

        相关实验:非同位素标记探针的酶法检测实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  以生物素酰化探针与载玻片上样品杂交并洗片(“荧光原位杂交实验”基本方案1~6步)。

        2.  由1×SSC中取出玻片,尽可能吸去残留玻片上的缓冲液,但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻片上,放24 mm×60 mm 的盖玻片于封阻液上,将载玻片放于裹以铝箔的加湿盒中,置37℃温育30 min。

        3.  从加湿盒中取出玻片,倾斜使盖玻片滑掉,尽可能吸去残留封阻液,但不使玻片干燥, 加200 μl 链亲和素液于载玻片上,放盖玻片于液体上,玻片放入裹以铝箔的加湿盒中,置37℃温育30 min。
         
        4.  从加湿盒中取出玻片,倾斜使盖玻片滑掉,将载玻片放入含42℃ 0.1% Tween 20/PBS的Coplin广口瓶中,将瓶放入42℃振荡水浴中摇5 min,用42℃ 0.1%Tween 20/PBS重复洗片2次。
         
        5.  取出玻片,彻底吸去残液,不要使玻片干涸,加200 μl 生物素酰化HRPO溶液于玻片上,其上盖以24 mm×60 mm 盖玻片,放在裹以铝箔的加湿盒中,置37 ℃温育30 min。

        6.  接歩骤4,重复洗片。
         
        7.  从洗液中取出玻片,彻底吸去残留液,不要使玻片干涸。加0.015%H2O2于DAB底物液中,立即加200 μl DAB底物液于玻片上,其上盖以24 mm×60 mm 盖玻片,于室温暗处放10~20 min。

        8.  颜色沉淀呈肉眼可辨,室温下,以PBS洗片5 min 终止反应。
         
        9.  如需要,可做荧光复染以鉴别胞核(“荧光原位杂交实验”,步骤9)。 

        10.  用90%甘油或适当的防褪色固片介质,加盖玻片,用相差显微镜观察或照相。

        来源:丁香实验

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