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        碱性磷酸酶检测法

        相关实验:非同位素标记探针的酶法检测实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  生物素酰化探针与切片杂交、洗涤、封闭,然后与链亲和素溶液温育(“辣根过氧化物酶法检测”,步骤1~4)。
         
        2.  由0.1% Tween 20/PBS中取出玻片,吸去残液,勿使玻片干燥,加200 μl 生物素酰化碱性磷酸酶溶液于玻片上,加盖24 mm×60 mm 盖玻片。放入外裹以铝箔的加湿盒中, 置37℃温育30 min。
         
        3.  从加湿盒中取出玻片,倾斜使盖玻片滑去,将载玻片放入盛有42℃ 0.1% Tween 20/PBS液的Coplin广口瓶中,置42℃振荡水浴5 min,并于42℃ 0.1% Tween 20/PBS重复洗片2次。
         
        4.   将载玻片移至盛有42℃的pH9.5碱性磷酸酶缓冲液的Coplin 广口瓶中,于42℃摇动下洗涤5 min,更换缓冲液再洗5 min。
         
        5.  将玻片放入外裹以铝箔、含有50 ml 新鲜配制的NBT/BCIP 底物溶液的广口瓶中,放于37℃或室温(减慢反应)暗处。直至显示至适当颜色(15~60 min)。

        6.  室温下以PBS洗片5 min 终止反应。

        7.  如需要,可作荧光复染,以鉴别胞核(“荧光原位杂交实验”基本方案,步骤9)。
         
        8.  用90%甘油或适当的防褪色固片介质处理盖玻片,相差显微镜观察结果或照相。

        来源:丁香实验

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