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        标记DNA的3‘末端

        相关实验:大肠杆菌 DNA 聚合酶 Ⅰ Klenow 片段实验

        最新修订时间:

        原理

        选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关,标记DNA可稳定数月之久。
         

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  在20 μl 反应体积中,用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA。
         
        2.  加入20 μl Ci所需的[α-32P]标记下dNTP(400~800 Ci/mmol)和1 μl 5 mmol/l 3dNTP混合液。

        3.  如需要高比活,可加入80 μCi[α-32P]标记的dNTP,加入1 U klenow 酶,30℃’温育15 min。
         
        4.  75℃加热10 min 以终止反应。如果需要,从标记DNA中去除未掺入的前体dNTP。

        来源:丁香实验

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