实时定量 PCR 实验

实验分类：

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

实时定量 PCR( qPCR ) 于 1996 年由美国 Applied Biosystems 公司首先推出。传统 PCR 方法可对特定 DNA 片段进行指数级的扩增，并可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量分析。无论定性还是定量分析，都属于对 PCR 反应终产物的检测。但很多情况下我们更需要确定的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。由于该技术不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，而且与常规 PCR 相比，它具有特异性更强、结果准确可靠、自动化程度高等特点。

原理

实时定量 PCR 的基本原理是依靠荧光标记物和自动化仪器，每次循环都可读出荧光强度，实时监测了反应进程中的 PCR 产物，从而更精确地实现了对模板样品的定量及定性的分析。实时定量 PCR 的基础在于反应起始的模板 DNA 量与循环过程的指数期的扩增产物量之间存在着定量关系，利用荧光信号的实时监测和计算，可以反映出这种定量关系。在 PCR 反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期，因此可以在 PCR 反应处于指数期的某一点上来检测 PCR 产物的量，并且由此来推断模板的初始含量。

应用

实时定量 PCR 技术主要运用在以下几个方面：

1. 实时定量 PCR 技术应用在肿瘤诊断和研究方面

2. 实时定量 PCR 技术应用在基因突变及其多态性方面

3. 实时定量 PCR 技术应用在病原体检测方面

来源：丁香通实验团队

操作方法

实时定量 PCR 实验