PCR 技术

等位基因特异性 PCR，也称错配 PCR（mismatch PCR）， 扩增耐突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）， 错配扩增突变分析（mismatch amplification mutation assay，MAMA），是相较单链构象多态性分析（single stnmd conformation polymorphism，SSC

多重 PCR (multiplex polymerase chain reaction, MPCR) 也称复合 PCR，是在常规 PCR 基 础上改进并发展起来的一种新型 PCR 扩增技术，即可在一个反应体系中加入两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段，由 Chambehian 于 1988 年首次提出，其反应原理、反应试剂和操作过 程与常规 PCR 相同。多重 PCR 既有单个 PCR 的特异性和

全基因组 PCR，又称全基因组扩增 (whole genome amplification, WGA)，是一种对全部基因组序列进行非选择性 扩增的技术，主要目的是在如实反映基因组全貌的基础上最大限度地增加 DNA 的量，在没有序 列倾向性的前提条件下对微量组织、单个细胞的整个基因组 DNA 进行扩增，为后续的多基因、 多位点分析及基因组的全面研究提供足量的 DNA 模板。目前，用于全基因组 PCR

单分子 PCR，又称 homo-primer PCR，是一个 DNA 分子为模板，循环数无限的 PCR 技术。PCR 技术发展到今天，已经相当成熟，并衍生出许多新技术，如 RT-PCR、 RAPD、AFLP、 反向 PCR、巢氏 PCR、热启动 PCR、菌落 PCR 和实时 PCR 等。一般而言，为了有效地扩增出目 的 DNA, 反应体系中添加较多量的模板，反应程序中使用较少的循环数。如果模板量过

单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism, SNP), 是美国 MIT 人类基因组中心负责 人 Lander E S 等人于 1996 年发现的新一代遗传标记，它主要是指在基因组水平上由单个核苷酸 的变异所引起的 DNA 序列多态性，即指基因组内特定核苷酸位置上，存在两种不同的核苷酸， 且其出现的频率大于 1% , 如果出现频率低于 1%，则看作点突变。它是人

短串联重复序列 (short tandem repeats, STR) 的 PCR，也称微卫星 DNA (microsatellites) 或简单重复序列 (simple sequence repeats, SSR) 的 PCR，它的重复序列很小，其核心序列只有 2〜6bp ，重复次数通常为 15〜30 次。STR 广泛存在于真核生物基因组的编码区和非编码区中，其中以 dA-dC、 dA-dA-d

小卫星可变重复序列 PCR，1 号染色体长臂（lq42〜43）的小卫星 MS32 即 D1S8 位点的等位基因内部含有碱基数目相同但序列不同的两种重复单位，其差别在于重复序列 3'端第二个碱基 G 突变为碱基 A，导致产生或消除 HaeⅢ的酶切位点，利用 PCR 技术分别扩增这两种重复单位，电泳分离并用数字编码其排列图谱，从而获得数字化的遗传信息，该方法被称作数字编码的小卫星可变重复序列 PCR。

序列特异性寡核苷酸多态性 PCR，英文名是 PCR-sequence specific oligonucleotide polymorphism, PCR-SSOP。PCR-SSOP 常用于对人类白细胞抗原的 A、B、DR 进行分型，当患者需要进行骨髓或器官移植时，首先必须进行组织配型工作。如果捐受双方的遗传基因型相符合，那么受者发生「排斥反应」的概率减小，移植成功率也相对的提高。否则当双方的遗传

钳制 PCR，英文名是 PCR clamping，钳制 PCR 能够快速地检测到基因中的单个碱基突变，这对于基因诊断以及药物遗传学具有重要意义。钳制 PCR clamping 包括 PNA(peptide nucleic acids) 和 LNA(locked nucleic acids) 介导的两种。PNA 和 LNA 均为核酸类似物，它们可以高度亲和并特异地与 DNA 或 RNA 结合。目前，

简单序列重复区间 PCR，英文名是 inter－simple sequence repeat PCR， ISSR PCR，SSR 在真核生物中的分布是非常普遍的，并且进化变异速度非常快。有时为了增加多态性，常常采用一个 SSR 序列和一个随机引物组成的引物对，这样就又获得了另一种与 SSR 相关的标记，这种标记一端可以锚定在 SSR 序列中，另一端则可以通过随机引物来筛选，同一个 SSR 序列引物

序列特异性引物 PCR，英文名是 sequence specific primer， PCR－SSP，是基于核酸序列识别的方法。PCR－SSP 方法是设计出一整套等位基因组特异性引物，借助 PCR 技术获得 HLA 型别特异的扩增产物，通过电泳直接分析带型决定 HLA 型别，从而大大简化了实验步骤。优点是简单易行，分辨率可从低到高，成本低。缺点是不易自动化，不能检测新的等位基因，试剂盒需不断升级，

rep－PCR，是基于在原核与真核生物基因组中分布着特异保守的重复序列，这些序列一般包括重复性基因外回文序列 (repetitive extragenic palindromic, REP)，肠杆菌重复性基因间共有序列 (enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)和 BOX 元件，但是如今这个概念也扩大了，它涵盖了所有用重复性 DNA

通用 PCR，英文名是 universal PCR，通用 PCR 作为一种基本的分子生物学技术，通过与其它新兴的基因分析技术结合。与经典 PCR 相比，通用 PCR 的应用把系统发育的序列比较分析范围扩展到了纲或门的分类水平上。而且此法对鉴定标本和划分生物类型在种群中的位置起重要作用。面对生物种类繁多、核酸序列千差万别，通用 PCR 技术的应用，不但最大限度地减轻了使用者不必要的工作量，也减少了出

任意引物 PCR,英文名是 arbitrarily primed PCR,AP－PCR,也称随机扩增多态性 DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)，随机引物 PCR(random primer PCR,RP－PCR)。目前，用于任意引物 PCR 的方法主要有 2 种：AP－PCR 方法和 RAP－PCR 方法。

巢式 PCR 是利用第 1 轮 PCR 产物作为第 2 轮 PCR 的模板，除使用第 1 轮的 1 对特异引物之外，在第 2 轮 PCR 反应中，使用 1 对新的特异引物，它们与模板 DNA 的结合位点处于第 1 轮引物扩增出的 DNA 片段内，这样在第 2 轮中错误扩增的可能性极低。目前用于巢式 PCR 的方法主要有 7 种：常规巢式 PCR、半巢式 PCR、反转录巢式 PCR、共有序列巢式 P

单细胞PCR利用流式细胞技术可以分 离出某个特定类型的细胞。利用单个细胞可以在DNA 或mRNA水平上进行PCR分析，从而找到单个细胞内 的分子改变情况。目前，应用于单细胞PCR的方法主要有1种：单细胞PCR。

PCR-单链构象多态性是依据这种DNA单链构象特性，结合凝胶电泳技术，以检测基因变异的技术。目前，应用于PCR-单链构象多态性的方法主要有1种：PCR-单链构象多态性。

差异显示PCR (mRNA differential display PCR, DD-PCR)技术，又称差异显示反转录 PCR (dif¬ferential display reverse transcription PCR, DDRT-PCR)。这种方法将随机引物和锚定 cDNA 引物结合使用，可以获得起始于poly (A)尾并向上延伸50~600个核苷酸的片段，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将来源不

数字PCR (digital PCR)是将传统PCR的指数倍信号转换成线性的数字信号，通过特定的 仪器读值，并利用统计学方法来分析PCR产物。目前用于数字PCR的方法主要有1种：普通数字 PCR。

PCR在临床诊断及流行病调查中的应用是通过介绍多种PCR的实验方法、原理、步骤，从而确定不同的PCR方法在临床诊断和流行病调查中的实际应用。目前，用于PCR在临床诊断及流行病调查中的应用的方法主要有7种：表位特异PCR在临床诊断及流行病调查中的应用、双标记PCR在临床诊断及流行病调查中的应用、降落PCR在临床诊断及流行病调查中的应用、16 SrRNA PCR在临床诊断及流行病调查中的应用、PCR偶