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        钳制 PCR

        实验分类:

        PCR 技术

        别名:

        PCR clamping

        最新修订时间:

        简介

        钳制 PCR,英文名是 PCR clamping,钳制 PCR 能够快速地检测到基因中的单个碱基突变,这对于基因诊断以及药物遗传学具有重要意义。钳制 PCR clamping 包括 PNA(peptide nucleic acids) 和 LNA(locked nucleic acids) 介导的两种。PNA 和 LNA 均为核酸类似物,它们可以高度亲和并特异地与 DNA 或 RNA 结合。

        目前,用于钳制 PCR 的方法主要有 1 种:PNA 介导的钳制 PCR。

        原理

        钳制 PCR 的基本原理:

        检测基因中是否存在突变时,采用两条竞争性引物,一条是与野生型互补的 PNA 引物,一条是与突变型互补的 DNA 引物。当基因未发生突变时,PNA 引物与靶序列结合的能力高于 DNA 引物,而在 PNA 结合靶序列后,由于 PNA 不能通过 DNA 聚合酶而延伸,从而不能引起片段的扩增;当基因中存在突变时,DNA 引物与靶序列的结合强度高于 PNA 引物,产生扩增片段。PNA 引物也可以位于突变引物的下游或者是扩增片段的 内部,当 PNA 与靶位点结合后,也能阻止扩增反应的进行。

        应用

        钳制 PCR 的常用应用领域如下:

        (一)检测突变

        (二)微生物多样性分析

        (三)转基因植物的监测

        (四)食品来源的探究

        来源:丁香实验团队

        操作方法

        PNA 介导的钳制 PCR

        PNA 介导的钳制 PCR,英文名是 peptide nucleic acids PCR clamping。PNA(肽核酸) 是一种以中性酰胺键为骨架并兼有多肽和核酸性质的独特化合物。PNA 与互补的 DNA 或 RNA 序列杂交具有极强的特异性和热稳定性;PNA 不易被蛋白酶和核酸酶降解;PNA/DNA 杂交结合强度与盐浓度无关。

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