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        在质粒载体中进行定向克隆实验

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 质粒的克隆位点有 46 个之多,而且还可以设计含有更多克隆位点的多聚接头(Brosius 1992 ) ],因此一般来说总是能够找到一个带有与某一特定外源 DNA 片段末端相匹配的酶切位点的质粒载体。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        在质粒载体中进行定向克隆实验

        一、材料1. 缓冲液和溶液ATP (10 mmol/L),乙醇,苯酚:氯仿(1:1, V/V),乙酸钠(3 mol/L,pH 5.2),TE ( pH 8.0)。2. 酶与缓冲液T4 噬菌体 DNA 连接酶,限制性内切核酸酶3. 凝胶琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶。4. 核酸和单核苷酸载体 DNA ( 质粒),外源或目的 DNA 片段。5. 专用设备旋转柱层析装置,温度可调 16℃ 的水浴装置。二、方

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