CRISPR/Cas9大片段删除细胞系定制

精准基因编辑细胞株定制

        随着ZFN、TALEN和CRISPR-Cas9技术的兴起，基因组编辑领域获得长远的发展。借助靶向基因组编辑工具，我们可以在基因组水平上精确编辑，设计产生全新的细胞株模型。定制精准编辑细胞株模型(genome edited cell line models)是体内研究基因功能的理想工具，已成为现代生物学在基因功能研究、肿瘤治疗和生物制药等领域重要的研究材料。基因组编辑技术（genome editing）是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。DNA修复系统主要通过两种途径修复DNA双链断裂（double-strand break,DSB）,即非同源末端连接（Nonhomologous end joining, NHEJ）和同源重组（homologous recombination, HR）。舒桐科技有限公司不断探索基因组编辑在多种细胞系中的应用，已成功在数十种细胞系中实现了高效基因组编辑。基于慢病毒包装技术、转座子技术及 CRISPR/Cas9 靶向基因编辑技术，推出了精准编辑细胞株定制服务，包括基因敲除、定点基因敲入、点突变和定点基因大片段删除。

定点基因大片段删除细胞系

       基因敲除细胞株模型是开展基因功能研究、靶点验证及药物筛选的重要工具。CRISPR/Cas9技术的出现，使得基因敲除细胞株的成功率大大提高，但在传统的基因敲除方案中，通常是利用非同源末端连接造成的移码突变使编码基因移码而失活，造成基因功能性敲除。在哺乳动物基因组中，约80%的序列是非编码的，这些非编码的基因也被证明有重要功能。对于这些非编码基因，有时移码突变或者部分外显子的缺失并不能有效使其功能失活，只有大片段的切除基因序列才能达到敲除目的。针对这一情况，鼓润医疗科技有限公司结合CRISPR/Cas9技术，开发出基于CRISPR/Cas9的大片段删除项目，可实现基因组片段敲除，敲除更彻底。尤其非常适合于lncRNA的敲除应用。

定点基因大片段删除细胞系构建流程

交付周期

3-4个月

 

定点基因大片段删除细胞系细胞系交付材料

（1）靶基因敲除单克隆细胞系冻存细胞2支；
（2）实验测序数据；
（3）详细的实验结题报告（包括实验步骤，引物信息，实验结果等）

舒桐基因大片段删除技术优势

（1）自主研发优化的sgRNA筛选系统，针对目的基因设计数条sgRNA，细胞内水平筛选切割效率最高的sgRNA。进一步构建multiplex sgRNA质粒。zui大程度提高编辑成功率；
（2）针对不同细胞系制定专属方案，有效提高编辑成功率；
（3）服务团队经验丰富，确保服务质量。