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- CRISPR /Cas9基因敲除细胞系
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- 2025年12月25日
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- 提供商：
威斯腾
- 服务名称：
CRISPR /Cas9基因敲除细胞系
- 规格：
1个基因
CRISPR/Cas9提高了基因编辑的准确性和特异性，使以前不可能开展的实验成为可能。它的效率是传统ZFN和TALEN系统的三到四倍。而且，只需导入几个不同的引导RNA，即可删除多个基因。该技术已广泛用于构建敲除细胞系，在这类细胞系中，靶标基因可以精确删除，从而完全去除其编码的蛋白质。根据不同细胞特点选择适宜的转染方法（病毒法，化学转染法或电转法）将gRNA序列和Cas9蛋白转入细胞中，并根据不同的转染方法进行不同时长的药筛。药筛完成后进行单克隆筛选，通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功敲除的阳性克隆，最终交付纯合子细胞株与相关数据报告。
基因编辑细胞服务说明：
基因情况：单基因或者多基因敲除
细胞类型：贴壁细胞、悬浮细胞
服务承诺：提供单克隆细胞株
服务优势：
- 速度：KO pool快至2周；KO单克隆纯合子，快至1.5月;
- 敲除保证：sgRNA 3～6条，确保获得敲除株;
- 多基因同敲：我司有两种成熟的多基因敲除实验体系，可同时/至少靶向3个基因靶点;
- 团队专业 我司Cas9基因编辑团队目前已完成60余例细胞基因敲除案例，具备丰富的经验；
- 种子优良 所有细胞种子均从中科院细胞库购买，代数低无污染；
- 敲除无损 所有的敲除单克隆均通过多代次测序验证，确保敲除性状稳定不回复；
- 质控严格 建系后连续3代细胞增殖活力评估。
基因敲除方案：
威斯腾生物根据客户需求，结合靶基因的情况进行方案定制。通常情况下，对于每个基因，我们会设计3条sgRNA，靶向切割位置靠前的外显子区域，通过细胞自身的非同源修复机制，在切割位置产生碱基的突变、插入或部分DNA序列的删除，造成错义突变、无义突变、移码突变、片段缺失，进而影响下游RNA或蛋白的功能。
此外，威斯腾生物CRISPR/Cas9研发团队推出pWST-KOS系列质粒，可同时介导多个基因靶点的切割，实现基因的大片段删除，或同时删除多个基因！
操作步骤：
交付内容：
1、经测序验证的目的基因敲除细胞株及对照细胞株各2支，每支细胞量不少于1*106 Cells。
2、详尽的实验报告：包括细胞株培养信息、实验步骤；sgRNA序列及测序峰图；单克隆筛选测序验证报告。
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学检测 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒包装 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 生长因子芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| 炎症因子芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趋化因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 基因编辑动物 | |
| 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 | |
| 膜片钳实验 | ||
| 细胞生物学检测 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理检测 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研设计指导&文章评估/润色 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 旷场实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 分子药理研究平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 生物膜片钳药物筛选平台 | 抗炎免疫药物药效学评价 | |
| 常规药物体外筛选 |
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文献和实验篇相关文献相继发表发表 (图 A)，这项技术如同病毒一般广泛又迅速的传播到世界各地，并且随着时间推移，这项技术也出现了许多革新与优化。 CRISPR 序列的生物学功能依然不够明确 1987 年，科学家们首次在大肠杆菌中发现了 CRISPR 基因，并且随后在 40% 的细菌中和 90% 的古细菌体内发现了类似序列。2005 年，CRISPR 序列与抗噬菌体的免疫作用联系起来。整个 CRISPR-Cas9 获得性免疫系统通路大致分为三个步骤：获得 CRISPR 序列-产生
分为五步，即gRNA文库选择、gRNA文库扩增、gRNA文库慢病毒包装、gRNA文库筛选、PCR扩增和NGS测序 1、gRNA文库选择 首先客户选择所需gRNA文库。如果客户根据具体需要提出文库定制（小于300个基因），我们将根据客户提供的基因群信息进行单个基因的gRNA设计，保证每个基因设计3个不同的gRNA，最大程度确保基因功能的突变。我们采用的载体是单/双慢病毒载体，单慢病毒载体是一个载体上同时携带单个gRNA和cas9基因，双慢病毒载体是一个载体上只有单个gRNA，cas9蛋白则由单独
手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
一、CRISPR-Cas 系统简介图 1 CRISPR-Cas9 系统介绍CRISPR-Cas9 系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具，它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9 系统包括：Cas9 酶和一个向导 RNA。 向导 RNA 作用是引导 cas9 到基因组的特异性位点上切割。如图 1 所示。目前为止，CRISPR-Cas9 系统主要有两方面应用: 基因敲除和基因敲入。基因敲除时, 一旦 DNA 的双链断裂反应（DSB）被 Cas9 切割诱导发生, 细胞会启动 NHEJ
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