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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Flavonoid glycosyltransferase (UFGT) test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样

类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT) 试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。类黄酮糖基转移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是花色苷合成过程的最后一个酶,可以把不稳定的花色素催化成花色苷,在一定范围内,UFGT活性与花色素苷的合成呈现正相关。
测定原理:
UFGT 催化UDPG 与槲皮素生成 UDP;UDP 在bing酮酸激酶与乳酸脱氢酶作用下,氧化 NADH为 NAD+,NAD+生成速度与 UDP 含量成正比,通过 340nm 吸光度下降速度反映 UFGT 活性。需自备的仪器和用品:
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存;临用前加入 20mL 试剂四溶解。试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 100μL×1 管,4℃避光保存; 试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
样品测定的准备:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、在EP 管中加入如下试剂| 试剂名称(μL) | 测定管 |
| 样本 | 20 |
| 试剂一 | 180 |
2、工作液配制:在试剂二中加入 20mL 试剂四溶解,再加入 20μL 试剂三,混匀待用。用不完的工作液分装后-20℃保存一个月,禁止反复冻融。
3、在 96 孔板中加入如下试剂
| 反应液 | 20 |
| 工作液 | 180 |
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UFGT 活力计算:
1、按照蛋白浓度计算单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
UFGT 活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V 反总÷(ε×d)×109÷(V 样×Cpr)÷T×10
=134×ΔA ÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟催化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
UFGT 活力(nmol/min/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(ε×d)×109÷(W× V 样÷V 样总)÷T×10
=134×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,240 min;10,稀释倍数;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;
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