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- YLKbio
- 上海
- YLK-024SH
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
UFGT
- 库存：
50
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- CAS号：
/
- 规格：
50管/48样
HPLC法50管/48样
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
类黄酮是植物次生代谢产物，糖基化是类黄酮基本结构形成的最主要的修饰反应之一，提高了类黄酮苷元的化学稳定性，这一过程主要由类黄酮糖基转移酶催化的，使类黄酮-OH与UDPG反应，是黄酮合成途径中的关键酶。
测定原理：
类黄酮糖基转移酶催化花青素与尿苷二磷酸葡萄糖反应产生花青苷，主要以矢车菊素3-葡萄糖苷（C3G）形式存在，用HPLC检测产物可反映类黄酮糖基转移酶的酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、研砵、离心机、恒温水浴锅、100目筛、高校液相色谱、针头过滤器（水系、0.22μm）、滤膜（水系、0.45μm）、耐水C18柱（4.6×250mm）、样品瓶、甲酸、甲醇（色谱级）、超纯水
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加全部试剂三溶解。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃保存。
标准品：标准品×1支，-20℃保存。
类黄酮糖基转移酶（UFGT）试剂盒产品图片展示：
样本处理：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：2~5的比例（建议称取约0.5g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
实验前的准备工作：
1、检测产物制备
| 对照管 | 测定管 | |
| 样本（μL） | 100 | 100 |
| 试剂二（μL） | 100 | |
| 试剂一（μL） | 150 | |
| 充分混匀，30℃反应30min | ||
| 试剂一（μL） | 150 | |
| 试剂二（μL） | 100 | |
| 充分混匀，10000g，4℃，离心10min，取上清过0.45μm水系滤头，待检测。 | ||
蒸馏水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。
3、流动相的配制：流动相A为1.6%甲酸水溶液； 流动相B为1.6%甲酸甲醇溶液。
4、将配好的流动相超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。
5、标准品的配制：
在标准品中加入1mL甲醇，配成5μmol /mL 母液，将母液用甲醇分别稀释成2μmol/mL ，1μmol/mL 、0.5μmol/mL 、0.25μmol/mL、0.125μmol/mL的标准品溶液。针头式过滤器过滤后待测。
测定操作步骤
1. 开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量10 μL，梯度洗脱为0~5min，85%A+15%B; 5~10min，85%A+15%B; 10~30min，80%A+20%B; 30~30.1min， 60%A+40%B; 30.1~40min，0%A+100%B。流速1mL/min，柱温30℃，走样时间为50min，检测波长530nm，设置完毕保存方法组。
2.初始设置流动相A=85%，流动相B=15%，流速1 mL/min，待基线稳定后开始加样。
3.加入标准品10 μL，在50min内可分离C3G，C3G的保留时间在25min左右，（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的C3G标准品的峰面积。
4. 加入样品10 μL，在相应保留时间处检测C3G的峰面积。
酶活计算：
1.以标准品浓度（μmol/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标计算C3G标准曲线。将样品峰面积代入标准曲线，计算样品C3G含量。
2.酶活单位定义：
A.每毫克组织蛋白每分钟催化反应产生1μmolC3G定义为一个酶活单位。UFGT活性（μmol/min/mg prot）= C×V反总÷（V样×Cpr）÷ T
=0.117×C÷Cpr
B.每克组织每分钟催化反应产生1μmolC3G定义为一个酶活单位。UFGT活性（μmol/min/g 鲜重）= C×V反总÷（V样×W÷V样总）÷ T
=0.117×C÷W
C.C3G浓度，μmol/mL ；V反总：反应总体积，0.35mL；V样：加入样本量，0.1mL，V样总：加入提取液体积，1mL，Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：样本质量，g，T：反应时间，min
注意事项：
1.流速由小到大调节，避免柱压过大。
2.使用完毕时，先用50%的甲醇水溶液洗色谱柱45min，再用纯甲醇冲洗色谱柱30min。
3.标准品的稀释倍数要根据样品中C3G浓度确定，样品中C3G的峰面积必须落在不同浓度的C3G标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。
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