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免疫荧光检测
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。免疫荧光检测是将荧光素与抗体连接成荧光抗体,再与待检标本中的抗原反应,将反应物置荧光显微镜下观察抗原抗体复合物散发的荧光,借此对标本中的抗原进行鉴定和定位,锐博生物可提供优质可靠的免疫荧光检测服务。
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文献和实验;每孔总量为 0.2ml 。 3. 在 37 ℃ 5 % CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 24 小时。 4. 直接在荧光检测仪上检测荧光强度,激发波长 530nm ,发射波长 590nm 。各孔荧光强度值应减去培养液对照荧光强度的平均值,各复孔荧光强度的平均值记为 AF 。按下式计算特异性杀伤百分比: 特异性杀伤(%)= 100 × [AF 靶细胞对照-( AF 实验孔- AF 效应细胞对照) ]/AF 靶细胞对照
间接标记法 1. 制备单细胞悬液; 2. 细胞计数,取出 1×106 个细胞于试管中; 3. 用台盼蓝染色计活细胞数,要求活细胞数 >90~95%; 4. 在试管中加入一抗, (剂量按照说明书的要求) ,孵30育~60 分钟; 5. PBS 洗涤 1~2 次,1500rpm,离心 3 分钟,弃上清; 6. 加入二抗,孵育 20~30 分钟; 7. PBS 洗一次,1500rpm,离心 3 分钟,弃上清; 8. 加 300μ l PBS,上机检测( 若不能
由于NF-kb采用免疫荧光检测可能会出现非特异性结合,一般转核观察NF-kb采用荧光效果欠佳,建议是否考虑采用激光共聚焦检测,其效果要比前者好多了。供参考。 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号:shixiongcoming
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