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- 2026年01月21日
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锐博生物
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miRNA Sensor报告基因载体
技术特色：
■ 我们提供的载体均为非病毒载体
■ 过表达载体有 NeoR 或EGFP 等不同标记的骨架可选
■ 可根据客户的不同需求构建不同的表达载体，能够保证所克隆序列的正确性及完整性
■ 在哺乳动物细胞内高效过表达
■ 提供对应的质粒（2*5ug）、甘油菌（100μL ）和实验报告书
miRNA Sensor报告基因载体主要用于检测细胞内目标miRNA的活性变化，譬如内源竞争性RNA（ceRNA）对miRNA活性的影响。锐博生物miRNA Sensor报告基因载体以pmiR-RB-Report™载体骨架为基础，将目标miRNA的结合序列克隆至海肾萤光素酶基因基因(hRluc)下游，目标miRNA可通过该结合序列调控海肾萤光素酶的表达，故可以海肾萤光素酶基因作为报告基因，以萤火虫萤光素酶基因(hLuc)作为内参基因，通过检测海肾萤光素酶活性的相对变化情况来判断细胞内miRNA的活性变化，如可以调控miRNA的ceRNA高表达，则miRNA被ceRNA结合，活性下降，海肾萤光素酶的相对活性上升。
参考文献或案例
[1] Yang L, Han B, Zhang Y, et al. Engagement of circular RNA HECW2 in the nonautophagic role of ATG5 implicated in the endothelial-mesenchymal transition[J]. Autophagy, 2018, 14(3): 404-418. （IF：11.059 锐博产品：miRNA载体 研究领域：自噬 东南大学）
[2] Yang C, Yuan W, Yang X, et al. Circular RNA circ-ITCH inhibits bladder cancer progression by sponging miR-17/miR-224 and regulating p21, PTEN expression[J]. Molecular cancer, 2018, 17(1): 19. （IF：10.679 锐博产品：环状RNA载体 研究领域：膀胱癌 南京医科大学第一附属医院）
[3] Han B, Zhang Y, Zhang Y, et al. Novel insight into circular RNA HECTD1 in astrocyte activation via autophagy by targeting MIR142-TIPARP: implications for cerebral ischemic stroke[J]. Autophagy, 2018, 14(7): 1164-1184. （IF：17.848 锐博产品：miRNA载体、茎环法引物、mimic 研究领域：缺血性卒中 东南大学）
[4] Liu Z, Chen X, Zhang Z, et al. Nanofibrous Spongy Microspheres To Distinctly Release miRNA and Growth Factors To Enrich Regulatory T Cells and Rescue Periodontal Bone Loss[J]. ACS nano, 2018, 12(10): 9785-9799. （IF：13.903 锐博产品：miRNA载体 研究领域：牙周骨丢失 北京大学口腔医学院）
[5] Wang H, Chao K, Ng S C, et al. Pro-inflammatory miR-223 mediates the cross-talk between the IL23 pathway and the intestinal barrier in inflammatory bowel disease[J]. Genome biology, 2016, 17(1): 58. （IF：14.028 锐博产品：miRNA载体、mimic & inhibitor 研究领域：炎症性肠病 中山大学第一附属医院）
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文献和实验报告基因载体 (1)报告基因 载体的特点：除了具有表达蛋白质所需要的结构外，理想的报告基因载体本身无调节结合位点或序列，而具有有意插入的调节结合位点，尽管可以从报告基因载体除去已知的结合位点，减少报告基因上游的转录，但从几千kb的DNA中去除所有潜在的调控序列是不可能的。因此在使用报告基因载体时，应使用合适的对照载体。报告基因质粒载体一般在大肠杆菌中繁殖，因此包括一个DNA复制起始点(ori)和基因筛选标记，通常为氨苄西林抗性基因(Ampr)。另外还具有丝状噬菌体复制起始
，目标靶mRNA降解导致表达水平的下降，而第二个实验中荧光素酶转录本仅仅下降1.2倍，这种目的基因表达水平下看起来象源于miRNA介导的翻译抑制降，而不是siRNA介导的影响mRNA的稳定性导致。实验表明：siRNA可能以miRNA的方式作用于mRNA。实验人员还进行了另一个实验：改变第二个实验中的不匹配环的碱基序列看起来不影响抑制效果，但是siRNA和报告基因上的结合位点的匹配程度越高抑制效果越好，增加siRNA的量，抑制效果越好――这一点和抑制的情况一样――唯一不同的是：完全匹配的结合
janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数） woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
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