荧光检测CMC

1． 用含 10 ％小牛血清和抗生素的 RPMI-1640 培养液将 K562 细胞配成 1 × 10⁵ /ml 浓度。用同样培养液将 PBMC 配成 1 × 10⁶ /ml 浓度。

2． 取 96 孔圆底细胞培养板，每孔加 0.1ml K562 细胞悬液；每孔加适量 PBMC 使效靶比为 1 ： 1 ～ 5 ： 1 ，每种处理 3 个复孔； 3 个对照孔只加效应细胞； 8 个对照孔只加靶细胞； 4 个对照孔只加细胞培养液。每孔加 20 μ l Alamar Blue ；每孔总量为 0.2ml 。

3． 在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 24 小时。

4． 直接在荧光检测仪上检测荧光强度，激发波长 530nm ，发射波长 590nm 。各孔荧光强度值应减去培养液对照荧光强度的平均值，各复孔荧光强度的平均值记为 AF 。按下式计算特异性杀伤百分比：

特异性杀伤（％）＝ 100 × [AF 靶细胞对照－（ AF 实验孔－ AF 效应细胞对照） ]/AF 靶细胞对照