实时定量PCR技术(RT-PCR)是基因表达检测最常用的方法之一,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具,目前已得到广泛应用。
锐博生物自主研发了一系列基因表达检测方法与试剂盒以及引物合成技术,可针对不同样本、不同检测需求提供高质量的qRT-PCR服务,涵盖了miRNA qRT-PCR检测服务、lncRNA/circRNA/mRNA qRT-PCR检测服务等。
锐博生物提供专业可靠的lncRNA、circRNA、mRNA qRT-PCR检测服务,能够确保基因表达检测实验的高灵敏及准确性。
qRT-PCR技术以其高灵敏度及高准确性,已成为RNA表达丰度检测的一个重要标准,二代测序及芯片数据往往都需要qRT-PCR检测进行验证,常规实验中的相对定量检测或绝对定量检测,qRT-PCR也是最合适的方法。
目前数据库对lncRNA序列的收录及注释都不完备,大部分lncRNA的表达丰度也比较低,对lncRNA引物设计策略及qRT-PCR检测提出了一定的挑战。锐博生物有着丰富的lncRNA引物设计经验及qRT-PCR检测经验,为lncRNA检测提供真实而可靠的结果。
技术支持或应用实例
环状RNA是近年来非常受关注的一类单链闭环RNA,由RNA初级转录产物通过back-splicing而形成,除了成环junction之外,其它部分序列与线性转录本是一样的,故需通过divergent引物进行RT-PCR或qRT-PCR检测,而同一个线性转录本有可能剪切加工成多种circRNA,也会对circRNA的引物设计和检测带来更多的复杂性。锐博生物在circRNA引物设计及qRT-PCR检测方面有丰富的实践经验,从引物设计到qRT-PCR检测,都可以提供合适的方案及可靠的结果。
环状RNA(circRNA)是一类单链闭环RNA,一般由转录出来的线性RNA通过back-splicing而形成。由于RNA加工过程存在多样化的可变剪切,往往需要对高通量测序及生信分析得到的circRNA进行鉴定,包括对splice junction进行鉴定以及对circRNA的序列组成进行鉴定。下图为鉴定实验示意图,其中Forward Primer-1及Reverse Primer可以组合进行PCR或qPCR,对进行常规的circRNA表达丰度进行检测及对扩增产物进行测序以鉴定splice junction的确切序列(用过表达载体表达的circRNA成环准确性也可使用该对引物鉴定),而Forward Primer-2及Reverse Primer组合PCR的产物进行测序则可鉴定circRNA的序列组成。
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