实时定量PCR技术(RT-PCR)是基因表达检测最常用的方法之一,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具,目前已得到广泛应用。
锐博生物自主研发了一系列基因表达检测方法与试剂盒以及引物合成技术,可针对不同样本、不同检测需求提供高质量的qRT-PCR服务,涵盖了miRNA qRT-PCR检测服务、lncRNA/circRNA/mRNA qRT-PCR检测服务等。
锐博生物可以针对不同样本、不同检测需求提供高质量qRT-PCR 服务,利用Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR 和miDETECT A Track™miRNA qRT-PCR 系统开展实验,结果可靠,重复性好。
a)样品RNA准备
b)RNA质量检测
c)逆转录合成cDNA
d)实时荧光定量PCR
e)分析结果,提供实验报告
使用Bio-Rad CFX96 进行SYBR Green 荧光定量检测。
a)相对定量:以U6 snRNA 或5S rRNA 为内参,检测样本中相关miRNA 表达量;
b)绝对定量:以化学合成的miRNA 成熟链为标准品,做5 个梯度点以上稀释后制作定量标准曲线,
通过标准曲线对待测miRNA 进行绝对定量。