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锐博生物
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miRNA qRT-PCR检测
锐博生物可以针对不同样本、不同检测需求提供高质量qRT-PCR 服务,利用Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR 和miDETECT A Track™miRNA qRT-PCR 系统开展实验,结果可靠,重复性好。
服务流程
a)样品RNA准备
b)RNA质量检测
c)逆转录合成cDNA
d)实时荧光定量PCR
e)分析结果,提供实验报告
服务方法及仪器
使用Bio-Rad CFX96 进行SYBR Green 荧光定量检测。
服务项目
a)相对定量:以U6 snRNA 或5S rRNA 为内参,检测样本中相关miRNA 表达量;
b)绝对定量:以化学合成的miRNA 成熟链为标准品,做5 个梯度点以上稀释后制作定量标准曲线,
通过标准曲线对待测miRNA 进行绝对定量。
项目举例

Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR 检测的扩增曲线

Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR 检测的融解曲线
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文献和实验【求助】miRNA mimic qRT-PCR检测可以提高多少倍?
nvonne 我购买的miRNA mimic 带FAM标记,本打算用流式检测转染效率,但发现荧光信号很弱,转染后采用定量PCR检测miRNA的表达变化,相对定量分析,发现mimic组比NC阴性对照组的miRNA表达量提高了100多倍,这虽然表明转染mimic成功,但总感觉这么高的变化有点太离谱了是不是?也没查到相关文献,谁能给我一些参考?非常感谢 zhujoker 顺转就是这么高,我的也是这样,有的能够上调1000倍
RNA, snRNA),small interfering RNA (siRNA),micro RNA (miRNA)和mRNA。非放射性标记的探针还可以用于原位杂交研究miRNA或者mRNA在组织中的分布。 小分子RNA的检测 由于小分子RNA是一类很小的分子,部分小分子RNA表达水平可能很低,因而需要极为灵敏而定量的分析工具。由于其分子很小,用RT-PCR的方法来定量研究非常困难,目前多数研究人员采用Northern Blots――一种技术复杂而费力的方法来检测小分子RNA的存在。传统
、 miRNA靶基因的验证与miRNA靶基因 的预测方法相比,对miRNA靶基因进行实验验证的方法并不多,目前还没有一个快速、简便、高通量的鉴定方法。最直接的鉴定方法是, 利用荧光定量PCR及Westernblot方法分别检测转染或敲低miRNA后细胞中mRNA水平及蛋白水平的变化,从而确定miRNA与靶基因的对应关系。这种方法能够直接鉴定出miRNA的靶基因, 准确度高但不能鉴定miRNA的靶位点。转染或敲低miRNA:方式主要有两种,一种是构建miRNA过表达载体的稳定表达系统,一种是人工合成miRNA
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