- ￥3490
- YBio/钰博生物
- YB-723000y
- 中国
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Mycobacterium tuberculosis(MTB) LAMP Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 规格：
50次
Mycobacterium tuberculosis(MTB) LAMP Kit
非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine
Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死
率几乎高达 100%，ASF 最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此
ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了
简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。
2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。
同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。
4. 特异性高，由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物，比使用 2 条引
物的 PCR 专一性更高。
5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。
7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 4×荧光及可视化 LAMP MagicMix | 250 μL（绿盖） |
| 试剂二 | 20×非洲猪瘟病毒LAMP引物混合液 | 50 μL（白盖） |
| 试剂三 | 非洲猪瘟病毒LAMP阳性对照（1×10E3拷贝/μL） | 150 μL（黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 待测样品。
使用方法 准备工作：如果使用水浴锅或金属浴，需要在实验启动前打开并调到 65℃。如果用金属浴，还必须在孔中加水以填充金属孔和反应管间的空隙。本公司发现很多水浴锅或金属浴温度不准，故建议先用阳性对照和阴性对照测试所用仪器在 60℃、62.5℃、65℃、67.5℃和 70℃五个温度下扩增效果，选择阳性和阴性颜色差异最大的温度进行扩增。
- 样品 DNA 的制备
2. 如果有 N 个样品，则至少需要做 N+2 个样品制备，包括一个制备阳性对照（制备时加入自备的跟要检测的靶分子相同的阳性对照模板，一起经历提取过程）和一个制备阴性对照（用水替代样品）。最后 N+2 个样品一起进行 DNA 提取操作，得到 N+2 个 DNA 样品。
二、荧光及可视化 LAMP 扩增及检测（20μL 体系）
3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加 LAMP阴性对照和 LAMP 阳性对照各1个。在 N+4个 0.2mL PCR管中加入下列成分：
| 成分 | N+2个样品管 | LAMP阴性对照 | LAMP阳性对照 |
| 2 ×可视化 UNG-LAMP MagicMix | 各 10μL | 10μL | 10μL |
| 非洲猪瘟病毒LAMP引物混合液 | 各4μL | 4μL | 4μL |
| N+2 个样品 DNA | 各 6μL | -- | -- |
| LAMP 阴性对照（水） | 6μL | ||
| LAMP 阳性对照（非洲猪瘟 病毒 LAMP 阳性对照的 100 倍稀释液） | -- | -- | 6μL |
4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反
应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反
应后比对。
5. 置于 25℃5 分钟（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩增
60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没
有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50uL
石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。
7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照
相留底。
8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳 性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同 的两个样品）：
10. 如果是用荧光 PCR 仪进行扩增，则可分析扩增曲线和 Ct。试剂盒提供的阳性对照的 Ct 将小于 65，如果大于 65，说明试剂可能失效，需跟厂家联系。无模板阴性对照和无引物阴性对照的 Ct 将大于 90。如果任何小于 90，则说明试剂或环境被污染，需重复实验或跟厂家联系。如果阳性对照和阴性对照 Ct 都在正常范围，则分析样品的 Ct。Ct 小于 65 的判断为阳性，大于 90 判为阴性，在 65-90 之间则需要重复检测。
11. 如果使用 PCR 仪、金属浴或水浴进行扩增，肉眼检测，再使用荧光定量PCR 仪进行终点法荧光读数来判断阴阳性，则先比较阳性对照和阴性对照。阳性对照样品扩增后信号增幅应该超过 100%，阴性对照扩增后信号增幅应该低于 50%，否则实验无效，请与厂家联系。如果两个对照均有效，则比较样品扩增前后荧光读数的差值。如果扩增后荧光信号增幅低于
50%，则判断为阴性。如果荧光信号增幅高于 100%，则判断为阳性。荧光信号增幅在 50-100%之间的，则需要重测。
12. 当实时荧光检测和可视化检测同时用于判读结果时，如果彼此不一致，以实时荧光 LAMP 的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果20-30 分钟，也就是说，在 qPCR 仪上第 30 分钟时呈现阳性的样品，其反应液的颜色变化一般在第 50-60 分钟时才能观察到。
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文献和实验猪瘟病毒（CSFV）抗体 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中 猪瘟病毒（CSFV）抗体 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗 原 夹心法测定 标本 中 猪瘟病毒（CSFV ）抗体 水平。用纯化的 猪瘟病毒（CSFV ） 抗 原 包被微孔板，制成固相抗 原 ，往包被 抗原 的微孔中依次加入 猪瘟病毒（CSFV ）抗体
释放酶活；一类是抗体法修饰的热启动酶，如 Champagne Taq ，预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间，方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢？如果实验对保真度的需求不高，那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍，可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段，对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
恩泽康泰进军家畜外泌体研究领域——全面解锁猪/牛/羊/鸡外泌体研究
的潜在指标(Animal. 2021 Apr;15(4):100182. IF=3.6 2区)，等研究。 b.疫病/家畜疾病 急性肺损伤、猪流行性腹泻病毒感染、非洲猪瘟病毒（ASFV）、亚洲鸡瘟感染传播等，在养猪等家畜业都有一定的发病率，给患病动物造成了极大的痛苦，同时也给养殖户造成了巨大的经济亏损，严重的可造成患病动物死亡。因此，阐述外泌体介导的家畜疾病发病和感染病毒传播机制，也是一个需要进行研究的方向，以期为家畜养殖生产中相关疾病防控提供
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