- ￥3490
- YBio/钰博生物
- YB-758700
- 中国
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
B Virus(BV) Double Dye LAMP Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 规格：
50次
B Virus(BV) Double Dye LAMP Kit
B 疱疹病毒（B Virus，BV）又称猴疱疹病毒 I 型，其因感染猴类而得名，
但是当人被感染 BV 的猴咬或抓伤后也可发生皮肤损害，会出现淋巴结炎及流
感样综合征，甚而并发病毒性脑炎。发病部位主要是皮肤、淋巴，相关症状为
口咽部水疱状损害、疲劳、肌痛、疱疹，同时也会带来头痛的并发疾病，对人
体健康具有重要危害，因此 B 疱疹病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有
着重要作用。本公司在自己开发的专利技术基础上开发了简单快捷的 B 疱疹病
毒双染料 LAMP 试剂盒，它具有下列特点：
1. 一般 60 分钟内出结果（取决于靶分子浓度），比 PCR 快约 1 小时。
2. 对 20 μL 的反应体系，最大样品加样量达到 14 μL。
3. 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，
也可用荧光 PCR 仪进行实时荧光检测。
4. 内含的 dUTP-UNG 可防交叉污染。
5. 特异性比 PCR 高，因为 LAMP 扩增使用 4-6 条引物而不是两条。
6. 假阴性率低。
7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
8. 只可用于科研，只可进行定性检测，不能用于定量检测。
9. 本产品只适用于 LAMP 检测，不适用于进行 RT-LAMP 检测。
10. 本产品足够 50 次 20 μL 体系的 LAMP 扩增和检测反应。
规格及成分：
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 4×双染料 LAMP MagicMix | 250 μL（绿盖） |
| 试剂二 | 20×B疱疹病毒LAMP引物混合液 | 50 μL（白盖） |
| 试剂三 | B疱疹病毒LAMP阳性对照（1×10E3拷贝/μL） | 150 μL（黄盖） |
| 试剂四 | 超纯水 | 1 mL（亮黄盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 待测样品。
使用方法 准备工作：如果使用水浴锅或金属浴，需要在实验启动前打开并调到 65℃。如果用金属浴，还必须在孔中加水以填充金属孔和反应管间的空隙。本公司发现很多水浴锅或金属浴温度不准，故建议先用阳性对照和阴性对照测试所用仪器在 60℃、62.5℃、65℃、67.5℃和 70℃五个温度下扩增效果，选择阳性和阴性颜色差异最大的温度进行扩增。
- 样品 DNA 的制备
2. 如果有 N 个样品，则至少需要做 N+2 个样品制备，包括一个制备阳性对照（制备时加入自备的跟要检测的靶分子相同的阳性对照模板，一起经历提取过程）和一个制备阴性对照（用水替代样品）。最后 N+2 个样品一起进行 DNA 提取操作，得到 N+2 个 DNA 样品。
二、荧光及可视化 LAMP 扩增及检测（20μL 体系）
3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加 LAMP阴性对照和 LAMP 阳性对照各1个。在 N+4个 0.2mL PCR管中加入下列成分：
| 成分 | N+2个样品管 | LAMP阴性对照 | LAMP阳性对照 |
| 4×荧光及可视化LAMP MagicMix | 各 5μL | 5μL | 5μL |
| 20×B疱疹病毒LAMP引物混合液 | 各1μL | 1μL | 1μL |
| N+2 个样品 DNA | 各 14μL | -- | -- |
| 超纯水 | 14μL | 4μL | |
| 试剂盒提供的阳性对照（1×10E3 拷贝/μL） | -- | -- | 10μL |
4. 置混匀后进行扩增。由于本产品含双染料，可以根据实验室条件选择下列两种方式进行扩增和检测。
5. 如果使用金属浴或水浴，则必须先在每个反应管中加 30 μL 石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。65℃保温 120 分钟。
6. 如果使用荧光定量 PCR 仪：设聚合温度 65℃，1 次循环 1 分钟，120 个循环，每分钟在 FAM 通道采集一次荧光信号。
三、结果分析及解读
7. 如果是用水浴或金属浴进行的扩增，反应结束后只能肉眼判断结果。将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察。扩增阳性对照管内反应液将呈现蓝色，无模板和无引物的阴性对照将呈浅蓝色。如果扩增阳性对照管内反应液不呈现蓝色，或无模板和无引物的阴性对照任何一个呈现蓝色，则说明试剂有问题，实验无效。请跟厂家联系。
8. 如果实验有效，则样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明有扩增，如果接近无模板和无引物的阴性对照，则说明无扩增。反应结果示例如下（9为阴性，10 为阳性）：
9. 反应结束后，如是用荧光 PCR 仪扩增，则可分析扩增曲线和 Ct。试剂盒提供的阳性对照的 Ct 将小于 60，如果大于 60，说明试剂可能失效，需跟厂家联系。无模板阴性对照和无引物阴性对照的 Ct 将大于 120。如果任何小于 60，则说明试剂或环境被污染，需重复实验或跟厂家联系。如果对照结果正常，说明实验有效，再分析样品。样品的 Ct 在 60 以下的为阳性，90 以上的为阴性，60-90 之间的为疑难样品，需要重复一次，如果还在60-90，需要电泳检测。
10. 当实时荧光检测和可视化检测同时使用时，如果不一致，以实时荧光 LAMP的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果 20-30 分钟，也就是说，在 qPCR 仪上第 30 分钟时呈现阳性的样品，其颜色变化在第 50-60分钟时才能观察到。
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文献和实验组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR
1．LAMP引物的设计LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3' 端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5' 端的Flc区域序列相同。F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。BIP引物：下游内部引物
,如果GC含量高于60%，则选取GC丰度高的区,其它情况是标准设定状态。 设计合适的引物是进行LAMP反应的关键，通过考虑碱基组成，GC含量，二级结构的形成，Tm值等因素可以通过Pimer Explore)(一种专门设计LAMP引物的软件)来设计LAMP反应的引物。 在进行LAMEP引物设计的时候有以下几个关键点需要考虑： 1.引物之间的距离 F2区段的5’端到B2区段的5’端(LAMP反应扩增的区域)之间的距离建议是120~180bp。 F3区段的3’端到F2区段的5’端之间的距离
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