Dual-Lumi™ II双萤光素酶报告基因检测试剂盒

广州赛诚生物Luciferase核心实验技术：实验原理

、RNA剪接研究。 萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线，从而可以在最大程度上减小细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响，使得数据结果更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，故而没有交叉干扰。得益于超强的光

广州赛诚生物Luciferase核心实验技术：实验流程

。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而对照报告基因作为内对照，以使实验报告基因测试的结果归一化。作归一化可消除实验过程中减弱实验准确度的变化，如培养细胞的数量、细胞转染 及裂解的效率等。在研究转录调控启动子活性中，具体实验步骤如下。 1. 质粒转染细胞 1) 细胞 铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。 2) 转染：16h后转染萤光素酶报告基因 质粒和RNA，每个样品设置6个复孔 a) 配制DNA和转染试剂 : 96孔板转染质粒时

神奇的荧光素酶

β-Gal或GUS表达, 不利于准确定量报告基因的表达, 采用高温下预处理细胞裂解液可降低内源性β-Gal和CAT的干扰，但这些处理也会快速失活荧光素酶。因此,在此类双报告基因检测中, 必须以不同的步骤分别处理共转染的细胞裂解液，相当麻烦。 双萤光素酶报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶检测和海洋腔肠荧光素酶检测，可在单管中进行双荧光素酶报告基因检测,快速,灵敏,简便。但是早期的双萤光素酶技术需要先裂解细胞，检测萤火虫萤光素酶，然后淬灭萤火虫萤光同时激活海肾萤光素酶，再做第二个检测