新冠病毒特异性T细胞定量检测试剂盒（ELISPOT）

背景知识：
1、新冠病毒感染和T细胞免疫反应：
新冠病毒（SARS-CoV-2）正在全世界肆虐，其免疫保护和免疫损伤调控机制仍有待阐明。尽管已知特异性T细胞在新冠病毒感染免疫中有着重要作用，但是宿主T细胞免疫反应以及预存的交叉T细胞反应在疾病发展中如何发挥保护抑或损伤作用乃至如何影响临床结局等尚不清楚。通过定量检测抗体水平可以标准化评估特异性体液免疫反应，但是特异性T细胞反应的检测则相对较难，必须同时考虑三方面因素：一是患者个体间各不相同的HLA分子；二是被这些HLA分子提呈的来自新冠病毒蛋白组的千差万别的T细胞表位肽；三是除数量外更要考虑T细胞的功能或反应活性。
2、SARS-CoV-2特异性 T细胞检测的现状：
目前已报道的经实验验证的新冠病毒蛋白组T细胞表位仍然很少，尤其是所涉及的HLA分子种类很少，不能覆盖特定地区的广泛人群，因此无法制备针对广泛人群的通用型和精准化检测试剂。有些研究者使用大量新冠病毒蛋白的重叠肽来进行ELISPOT检测（多肽扫描法），或者重叠肽库刺激淋巴细胞群后进行T细胞功能表型的mass cytometry分析，有些则利用生信分析预测的大量T细胞表位肽，进行multiplexed peptide-MHC tetramer分析，或者刺激淋巴细胞群后做FluoroSpot检测。但是这些表位肽并不是真正经过验证的T细胞表位肽，大多数都是假表位，而且无法明确HLA分子的限制性和个体差异。鉴于上述原因，目前在国内外检测新冠病毒特异性T细胞的商业试剂盒仍然极少，更没有适用于中国人群MHC遗传特征的试剂盒。
产品介绍：
本公司根据SARS-CoV-2的4种结构蛋白（E、M、N、S）和多种非结构蛋白的全长氨基酸序列（包括武汉株和多种变异株），通过生物信息学分析、献血者外周血细胞进行DC-多肽-PBL共刺激实验，HLA-A分子竞争结合实验等手段，验证具有真实免疫原性的新冠病毒抗原肽，选取被中国人群中频率大于1%的所有13种HLA-A分子交叉提呈的215种新冠病毒T细胞表位肽，符合中国人群MHC遗传特征，覆盖绝大多数人群，分成11个肽库，研制成新冠病毒特异性T细胞定量检测试剂盒（ELISPOT法），用于定量检测新冠病毒感染者、密切接触者和疫苗接种者等外周血中新冠病毒特异性的、具有反应活性的、记忆型或活化型T细胞数量。
本试剂盒的优点：
1、定量检测SARS-CoV-2特异性T细胞，目前市场上没有同类试剂盒。
目前国内外市场极少有检测SARS-CoV-2特异性T细胞的商业试剂盒，更没有定量检测试剂盒。
2、可覆盖绝大多数患者，不需HLA等位基因分型
所用的215种抗原肽几乎遍布SARS-CoV-2所有结构蛋白和主要非结构蛋白的全长序列，能被上述13种优势HLA-A分子所提呈，其基因总频率占人群的95.5%以上，且每种抗原肽能被2-3种HLA-A分子交叉提呈，同时还可能被这13种以外的其他HLA-A分子所提呈，因此本试剂盒适用于绝大多数中国人群、东北亚和东南亚人群。
3、使用真实的抗原肽，可检测的T细胞克隆种类最多，能最大限度反映宿主的特异性T细胞免疫功能强弱
绝大多数研究用来检测SARS-CoV-2特异性T细胞的抗原肽都是重叠肽，没有经过免疫原性验证，也不清楚其HLA限制性。本试剂盒所用的215种抗原肽是通过细胞功能实验验证具有免疫原性的抗原肽，而且来自4种结构蛋白和多种非结构蛋白，目前具有最广泛的抗原代表性。
4、可以观察患者体内针对不同种类SARS-CoV-2抗原的特异性T细胞反应的强弱
本试剂盒将215种抗原肽按照抗原种类的不同分成11个肽库，因此在结果分析中可以观察不同新冠病毒蛋白在患者体内诱导的具有免疫反应活性的特异性T细胞的数量。
5、特异性好，灵敏度高，操作相对较简单，不需特殊仪器
在多种被研究报道的特异性T细胞检测方法中，ELISPOT是最经典的方法之一，被国内外广大科研工作者所使用和认同。它不但特异性好，而且灵敏度高，可以在一百万个细胞中检测出一个分泌特定细胞因子的阳性细胞。
6、质量可靠，稳定性好，所使用的一抗、二抗和PVDF膜板都是从国外大公司进口
本试剂盒检测活细胞功能，重复性和稳定性都超过国家标准；在规定贮存条件下保质期达6个月。