HBV特异性T细胞定量检测试剂盒（第一代）

产品介绍：
       HLA-A基因是主要的HLA I类基因，负责将病毒或肿瘤等内源性抗原肽提呈给CD8⁺ T细胞，诱导人体产生CTL免疫杀伤效应。中国人群中基因频率大于1%的优势HLA-A等位基因共有13种，在人群中的总频率超过95.5%。乙肝病毒的主要蛋白抗原有4种：表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg，其中包含核心抗原HBcAg序列）、DNA聚合酶（HBpol）和X蛋白（HBx）等。
   本公司根据HBV的上述4种蛋白抗原的全长氨基酸序列（包括我国流行的B和C基因型），通过6种T细胞表位肽预测数据库，虚拟预测了几百种被HLA-A分子提呈的HBV抗原肽；然后反复收集700余位乙肝患者的新鲜外周血，将PBMC细胞与预测肽共培养20小时，通过酶联免疫斑点实验（ELISPOT）检测PBMC中被多肽激活而分泌IFN-γ的T细胞数量。与预测表位肽共培养20小时后（刺激时间较短），出现阳性反应则说明该患者PBMC中预先存在该HBV表位肽特异性的并且处于记忆或活化状态的T细胞克隆，则说明该表位肽在乙肝患者体内具有真实的免疫原性，能够在被感染肝细胞内由HLA分子提呈出来，激活特异性T细胞，并以记忆T细胞或活化T细胞状态循环中外周血中。
评 通过上述细胞功能性实验，我们验证了103种在体内具有真实免疫原性的HBV的T细胞表位肽（9-10个氨基酸长度），申请了国家发明专利；并将这些抗原肽按照抗原种类不同分成8个肽库，制备成HBV特异性T细胞定量检测试剂盒（酶联免疫斑点法，ELISPOT）, 定量检测乙型肝炎患者、乙肝相关的肝硬化和肝癌患者PBMC中具有免疫反应活性的HBV特异性的CD8+T细胞数量,为监测疾病进展、判断预后、评价疗效、指导临床治疗方案以及预测停药后复发风险等提供全新的实验室指标。

试剂盒的优点：
1、定量检测HBV特异性T细胞，目前市场上没有同类试剂盒。
目前国内外市场没有检测HBV特异性T细胞的商业试剂盒，更没有定量检测试剂盒。
2、可覆盖绝大多数患者，不需HLA等位基因分型
所用的103种抗原肽几乎遍布4种HBV蛋白的全长序列，能被上述13种优势HLA-A分子所提呈，其基因总频率占人群的95.5%以上，且每种抗原肽能被2-3种HLA-A分子交叉提呈，因此本试剂盒适用于绝大多数患者。
3、使用真实的抗原肽，可检测的T细胞克隆种类最多，能最大限度反映乙肝患者的特异性T细胞免疫功能强弱
绝大多数研究用来检测HBV特异性T细胞的抗原肽都是某一或两种HBV抗原的重叠肽，没有经过免疫原性验证，也不清楚其HLA限制性。本试剂盒所用的103种HBV抗原肽是通过细胞功能实验验证具有免疫原性的抗原肽，而且来自4种主要抗原，目前具有最广泛的抗原代表性。
4、同时观察患者体内针对不同种类HBV抗原的特异性T细胞反应的强弱
本试剂盒将103种抗原肽按照HBV抗原种类的不同分成8个肽库，因此在结果分析中可以观察不同HBV抗原在患者体内诱导的具有免疫反应活性的特异性T细胞的数量。
5、同时观察患者整体T细胞库的反应活性
每份标本设置一个阳性检测孔，有丝分裂素PHA为刺激剂，既做阳性对照，又同时监测乙肝患者整体T细胞库的反应活性，属于临床已开展检测的淋巴细胞转化实验。
6、特异性好，灵敏度高，操作相对较简单，不需特殊仪器
在7种被研究报道的特异性T细胞检测方法中，ELISPOT是最经典的方法之一，被国内外广大科研工作者所使用和认同。它不但特异性好，而且灵敏度高，可以在一百万个细胞中检测出一个分泌特定细胞因子的阳性细胞。
7、质量可靠，稳定性好，所使用的一抗、二抗和PVDF膜板都是从国外大公司进口
本试剂盒检测活细胞功能，重复性和稳定性都超过国家标准；在规定贮存条件下保质期达5个月。