转基因构建35S启动子-WMVII基因PCR试剂盒

转基因构建35S启动子-WMVII基因PCR试剂盒实时定量PCR：
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号  反应物  剂量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  阳性模板上游引物F  0.5μl
3  阳性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  阳性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
同源盒蛋白HOXA11抗体    CPLX3 ELISA Kit    复合素3(CPLX3)ELISA试剂盒
组胺受体H1抗体    CPLX2 ELISA Kit    复合素2(CPLX2)ELISA试剂盒
同源盒蛋白HOXA9抗体    CPLX1 ELISA Kit    复合素1(CPLX1)ELISA试剂盒
同源盒蛋白HOXB5抗体    COQ10B ELISA Kit    辅酶Q10同源物B(COQ10B)ELISA试剂盒
肝细胞粘附分子抗体    COAA ELISA Kit    辅激活因子激活因子(COAA)ELISA试剂盒
磷酸化组蛋白去乙酰化酶5抗体    ACTN4 ELISA Kit    辅肌动蛋白α4(ACTN4)ELISA试剂盒
磷酸化组蛋白去乙酰化酶1抗体    ACTN3 ELISA Kit    辅肌动蛋白α3(ACTN3)ELISA试剂盒
磷酸化组蛋白去乙酰化酶2抗体    ACTN2 ELISA Kit    辅肌动蛋白α2(ACTN2)ELISA试剂盒
磷酸化HOMER3蛋白抗体    ACTN1 ELISA Kit    辅肌动蛋白α1(ACTN1)ELISA试剂盒
转化蛋白p21抗体    FUR ELISA Kit    弗林蛋白酶(FUR)ELISA试剂盒
转录因子HES-1抗体    CLDN9 ELISA Kit    封闭蛋白9(CLDN9)ELISA试剂盒
组蛋白H4-K4甲基转移酶抗体    CLDN8 ELISA Kit    封闭蛋白8(CLDN8)ELISA试剂盒
HOMER3蛋白抗体    CLDN7 ELISA Kit    封闭蛋白7(CLDN7)ELISA试剂盒
磷酸化HER3受体抗体    CLDN6 ELISA Kit    封闭蛋白6(CLDN6)ELISA试剂盒
磷酸化HER4抗体    CLDN5 ELISA Kit    封闭蛋白5(CLDN5)ELISA试剂盒
磷酸化HER4抗体    CLDN3 ELISA Kit    封闭蛋白3(CLDN3)ELISA试剂盒
羟类固醇脱氢酶17β3抗体    CLDN25 ELISA Kit    封闭蛋白25(CLDN25)ELISA试剂盒
羟基类固醇脱氢酶11β1抗体    CLDN24 ELISA Kit    封闭蛋白24(CLDN24)ELISA试剂盒
滋养层细胞抗原抗体3β-HSD抗体    CLDN23 ELISA Kit    封闭蛋白23(CLDN23)ELISA试剂盒
乙酰化组蛋白H4抗体    CLDN22 ELISA Kit    封闭蛋白22(CLDN22)ELISA试剂盒
磷酸化高迁移率核小体结合蛋白1    CLDN20 ELISA Kit    封闭蛋白20(CLDN20)ELISA试剂盒
附睾分泌蛋白4抗体    CLDN2 ELISA Kit    封闭蛋白2(CLDN2)ELISA试剂盒
三甲基化组蛋白H3抗体    CLDN19 ELISA Kit    封闭蛋白19(CLDN19)ELISA试剂盒
三羟基三甲基辅酶A还原酶抗体    CLDN17 ELISA Kit    封闭蛋白17(CLDN17)ELISA试剂盒
硫酸乙酰肝素蛋白多糖2    CLDN16 ELISA Kit    封闭蛋白16(CLDN16)ELISA试剂盒
肝癌相关抗原抗体hca25a    CLDN15 ELISA Kit    封闭蛋白15(CLDN15)ELISA试剂盒
己糖激酶3抗体    CLDN14 ELISA Kit    封闭蛋白14(CLDN14)ELISA试剂盒
人乙肝病毒pre S1/S2蛋白抗体    CLDN12 ELISA Kit    封闭蛋白12(CLDN12)ELISA试剂盒
人乙肝病毒pre S1蛋白抗体    CLDN11 ELISA Kit    封闭蛋白11(CLDN11)ELISA试剂盒
己糖激酶1抗体    CLDN10 ELISA Kit    封闭蛋白10(CLDN10)ELISA试剂盒
己糖激酶2抗体    CLDN1 ELISA Kit    封闭蛋白1(CLDN1)ELISA试剂盒
热休克蛋白90α抗体    CPOX ELISA Kit    粪卟啉原氧化酶(CPOX)ELISA试剂盒
肝细胞源性纤维蛋白原相关蛋白1抗体    SPP2 ELISA Kit    分泌型磷蛋白2(SPP2)ELISA试剂盒
红细胞分化相关基因蛋白抗体    SCGB2A2 ELISA Kit    分泌球蛋白家族2A成员2(SCGB2A2)ELISA试剂盒
同源异型盒基因HOXA13抗体    SCG5 ELISA Kit    分泌粒蛋白Ⅴ(SCG5)ELISA试剂盒
磷酸化组蛋白去乙酰化酶4抗体    SCG3 ELISA Kit    分泌粒蛋白Ⅲ(SCG3)ELISA试剂盒
磷酸化组蛋白去乙酰化酶7抗体    SCG2 ELISA Kit    分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)ELISA试剂盒
磷酸化组蛋白去乙酰化酶4抗体    SECTM1 ELISA Kit    分泌跨膜蛋白1(SECTM1)ELISA试剂盒
转基因构建35S启动子-WMVII基因PCR试剂盒磷酸化组蛋白去乙酰化酶7抗体    SCRN3 ELISA Kit    分离蛋白3(SCRN3)ELISA试剂盒
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
序号  反应物  剂量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  内参照上游引物F  0.5μl
3  内参照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待测样品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  总体积  50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。

PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。