慢病毒构建 干扰慢病毒构建

病毒滴度的测定
 滴定法原理：


病毒感染293T细胞48小时后，使用荧光显微镜（10×10倍）观察每个梯度感染的荧光细胞数，并选用荧光细胞数接近50的梯度，即10⁴梯度进行计数，每孔采用2个不同视野进行细胞计数，每个待测腺病毒共得到6个数值，最后计算平均数，按照公式：滴度=（荧光细胞数×每孔的视野数）/（加入病毒液体积×稀释倍数），计算出***-shRNA，***-shRNA，EGFP-NC病毒滴度。每孔的视野数 指24孔板每孔的面积/用于荧光细胞计数的照片对应的贴壁细胞面积，即2cm²/（1.05mm×1.4mm）=136荧光细胞数×每孔的视野数=每孔的荧光细胞总数





慢病毒在细胞水平的使用
什么是MOI？
“MOI”为”multiplicity of infection”的缩写，中文为“感染复数”或“复感染指数”，含义为感染时病毒和细胞数量的比值，即平均每个细胞感染的病毒活性单位数（TU number /cell）。在实验中将某种细胞感染达到80%时的MOI定义为这种细胞的MOI。
MOI与整合事件以及目的基因的表达相关。一定范围内，表达水平和MOI呈正相关。MOI取决于多种因素，如细胞状态，目的基因的大小与性质，细胞的感染效率等。所以，实验前需查阅相关文献，确定慢病毒对目的细胞的亲嗜性、MOI以及在体（in vivo）注射所需病毒量。若无文献支持，可以通过预实验得到合适的MOI。实际上，即使有文献支持，但由于所用细胞代数、细胞状态以及目的基因的差异，实际的MOI和文献报道也会不同，所以要安排预实验以确定所需MO  I以及病毒对细胞生长的影响