- ￥150
- 普利莱
- 中国
- C1054-100
- 2026年01月19日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4°保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
//
- 库存：
大量
- 供应商：
北京普利莱
- CAS号：
//
- 规格：
100ml
Western及IP裂解液 C1054
描述：Western及IP裂解缓冲液，为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案。
Western及IP裂解缓冲液(C1054)能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合能力或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。
储存：4℃保存
制备细胞裂解产物：
- 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
- 每50～100 ml PCV加入5倍体积IP裂解缓冲液（250~500 ml）,涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；
- 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物，
制备组织裂解产物：
- 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
- 加入 0.5-1 ml 预冷的IP裂解缓冲液；
- 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；
- 12000g 4℃离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物，可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。
注意：
- 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
- 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
- 在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择进行添加。
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文献和实验或者互作蛋白复合物（红色+黄色）洗脱 Step 5：分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验，先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照：证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白（IP）或者互作蛋白对（co-IP，比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y），即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照：用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了，固然是值得高兴
紫叶竹韵 做IP，之后Western 分析，看到有两条带，在25和50KD左右，应该是抗体的两条带，但是我的目的蛋白也是52KD的，这该怎么区分呢。 woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做（比如说IP用鼠的抗体，WB就用兔的抗体），这样就不会检测到抗体的两条带。 如果没有不同来源的抗体的话，就要做IP的时候尽量少放点抗体，跑胶跑得远一点，使得目的蛋白能够被看到，不过由于你的蛋白是在是太接近重链
Cell Lysis/Western/IPSteven Finkbeiner,Departments of Neurology and Physiology,UCSFcompiled by 6/95 by AJS from AB)Fresh 1X LysisFresh 1X LysisFinal5ml10ml2X Lysis 2.5 ml5mlNaCl0.25M0.25ml of 5M0.5 ml of 5MNa3VO40.1mM25l (μl) of 200 mM5l (μl) of 200
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