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6个月
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//
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大量
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普利莱
- CAS号:
//
- 规格:
50次/105次
| 规格: | 50次 | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 105次 | 产品价格: | ¥980.0 |
油脂食品甘油三酯酶法测定试剂盒 E1014
描述:试剂盒采用高效能试剂进行样本裂解和甘油三酯抽提,优化了GPO Trinder酶学反应组分和操作步骤。简单易行、灵敏度高检测范围为 20-2000µmol/L。可用于测量固态食品材料、含高浓度油料样品中的甘油三酯含量。
原理:(1)脂肪酶分解血清中的甘油三酯为甘油;(2)甘油激酶将甘油磷酸化为3-磷酸甘油;(3)3-磷酸甘油被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围:适用于固态食品材料样品中甘油三酯含量的测定。
组成 :(105次测定)
所需设备:酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。
操作步骤:
二. 裂解液处理:
1. 取适量上清液转移到1.5ml离心管中,进行步骤2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或-20ºC储存。
按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合即可,立即使用或4ºC保存<1天,变色弃去。
四.标准品稀释:
用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管。
五.甘油三酯浓度测定:
(可对样品和工作液比例进行微量调整)
原理:(1)脂肪酶分解血清中的甘油三酯为甘油;(2)甘油激酶将甘油磷酸化为3-磷酸甘油;(3)3-磷酸甘油被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢;其光密度值与甘油浓度成正比。
适用范围:适用于固态食品材料样品中甘油三酯含量的测定。
组成 :(105次测定)
- 裂解液 50 ml
- R1试剂 16 ml
- R2试剂 4 ml
- 4 mmol/L甘油标准品1 ml
所需设备:酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm、次选530、490nm。
操作步骤:
- 样本处理:
二. 裂解液处理:
1. 取适量上清液转移到1.5ml离心管中,进行步骤2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或-20ºC储存。
- 70ºC 加热10分钟,组织量多时可能出现絮状沉淀。
- 室温2000rpm离心5分钟,上层清液即可用于酶学测定。
按4:1比例,取4 ml试剂R1与1 ml试剂R2混合即可,立即使用或4ºC保存<1天,变色弃去。
四.标准品稀释:
用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管。
五.甘油三酯浓度测定:
- 参见下表进行加样。以96孔板为例,待测样品体积可在5、10、20µl之间,推荐以10µl为起始加样量。如果样品测量值超出线性范围,可进行适当稀释,最后根据稀释倍数计算浓度。
- 37ºC或25ºC反应 15分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
- 先用蒸馏水+工作液的空白管调零,然后测定各管OD值。
- 绘制标准曲线并计算甘油三酯浓度。
- 以每mg蛋白浓度校正甘油三酯含量。
- 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等会干扰测。高浓度EDTA会干扰测定。
- 样本即使保存在-20ºC的环境下,甘油三酯也会自发水解。因此建议样品4ºC保存时间应短于24小时,当-70ºC保存时,也应不超过1个月。
- 如果室温较低,应延长反应时间或在37ºC进行反应。
- Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
- Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
(可对样品和工作液比例进行微量调整)
| 96孔微板测定 | 1 ml比色杯测定 | |||||
| 空白管 | 标准品 | 样品 | 空白管 | 标准品 | 样品 | |
| 蒸馏水µl | 10 | 35 | ||||
| 标准品µl | 10 | 35 | ||||
| 样品µl | 10 | 35 | ||||
| 工作液µl | 190 | 190 | 190 | 665 | 665 | 665 |
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文献和实验该产品被引用文献
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- Li S, Meng F, Liao X, et al. Therapeutic role of ursolic acid on ameliorating hepatic steatosis and improving metabolic disorders in high-fat diet-induced non-alcoholic fatty liver disease rats[J]. PLoS One, 2014, 9(1): e86724.
- Wang J, Zhang Y, Zhuo Q, et al. TET1 promotes fatty acid oxidation and inhibits NAFLD progression by hydroxymethylation of PPARα promoter[J]. Nutrition & Metabolism, 2020, 17(1): 1-11.
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- Hu X, Wang T, Liang S, et al. Antibiotic-induced imbalances in gut microbiota aggravates cholesterol accumulation and liver injuries in rats fed a high-cholesterol diet[J]. Applied microbiology and biotechnology, 2015, 99: 9111-9122.
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- Wu W, Wang S, Xu Z, et al. Betaine promotes lipid accumulation in adipogenic-differentiated skeletal muscle cells through ERK/PPARγ signalling pathway[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2018, 447: 137-149.
- Lai S, Li Y, Kuang Y, et al. PKCδ silencing alleviates saturated fatty acid induced ER stress by enhancing SERCA activity[J]. Bioscience Reports, 2017, 37(6).
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相关实验
动物和一些昆虫体内的微生物可以分解纤维素,为这些动物提供营养。 四、其他 (一)果胶 一般存在于初生细胞壁中,也存在于水果中。它是果胶酸的甲酯。果酱就是利于水果的果胶制成的。 (二)菊糖 也叫菊粉,主要存在于菊科植物的根部,是多缩果糖。 (三)琼脂 某些海藻(如石花菜属)所含的多糖物质,主要成分是多缩半乳糖,含有硫和钙。琼脂不易被微生物分解,可作微生物培养基成分,也可作为电泳支持物。食品工业中常用来制造果冻、果酱等。1-2%的琼脂在室温下就能形成凝胶。
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