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油脂食品甘油三酯(TG)酶法测定试剂盒 E1014

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  • ¥680 - 980
  • 普利莱已认证
  • 北京
  • E1014
  • 2025年12月24日
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      4°保存

    • 保质期

      6个月

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      大量

    • 供应商

      普利莱

    • CAS号

      //

    • 规格

      50次/105次

    规格:50次产品价格:¥680.0
    规格:105次产品价格:¥980.0
    油脂食品甘油三酯酶法测定试剂盒    E1014
     
    描述:试剂盒采用高效能试剂进行样本裂解和甘油三酯抽提,优化了GPO Trinder酶学反应组分和操作步骤。简单易行、灵敏度高检测范围为 20-2000µmol/L。可用于测量固态食品材料、含高浓度油料样品中的甘油三酯含量。
    原理1)脂肪酶分解血清中的甘油三酯为甘油;(2甘油激酶将甘油磷酸化为3-磷酸甘油;(33-磷酸甘油被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢其光密度值与甘油浓度成正比。
    适用范围适用于固态食品材料样品中甘油三酯含量的测定
    组成 :(105次测定)
    1. 裂解液  50 ml
    2. R1试剂 16 ml
    3. R2试剂  4 ml     
    4. 4 mmol/L甘油标准品1 ml
    4 ºC保存  6个月有效
    所需设备:酶标仪、生化分析仪721722型可见光分光光度计。最佳工作波长550nm,如无此波长建议优先选用570nm、次选530490nm
    操作步骤:
    • 样本处理:
    减量称重法精确称重。推荐裂解液用量在1ml 左右,按比例每1mg组织加20µl裂解液以减少样品间蛋白和脂质含量变异而产生的误差。强烈建议裂解液用量在1ml左右,保证有效的匀浆裂解与脂质提取。用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器破碎组织。(不推荐超声方法,因其不能完全和均匀破碎。应根据预实验调整初始的组织细胞加入量),匀浆后静置10分钟。
    . 裂解液处理:
    1. 取适量上清液转移到1.5ml离心管中进行步骤2的操作。余下的裂解液可BCA法蛋白定量试剂盒(#P1511)进行蛋白定量或-20ºC储存。
    1. 70ºC 加热10分钟,组织量多时可能出现絮状沉淀。
    2. 室温2000rpm离心5分钟,上层清液即可用于酶学测定。
    三.工作溶液配制:
    4:1比例4 ml试剂R11 ml试剂R2混合即可,立即使用或4ºC保存<1天,变色弃去
    四.标准品稀释
    蒸馏、生理盐水或与样缓冲液一致的液体,将4 mM甘油标准品倍比稀释1000、50025012562.531.2515.6257.8125 µmol/L通常取其中4~6管即可,注意设置0浓度对照反应管
    五.甘油三酯浓度测定:
    1. 参见下表进行加样。以96孔板为例,待测样品体积可在51020µl之间,推荐以10µl为起始加样量。如果样品测量值超出线性范围,可进行适当稀释,最后根据稀释倍数计算浓度。
    2. 37ºC25ºC反应 15分钟。反应平衡后颜色在60分钟内稳定。
    3. 先用蒸馏水+工作液的空白管调零,然后测定各管OD值
    4. 绘制标准曲线并计算甘油三酯浓度
    Excel作图步骤:各标准管OD值为y轴,标准浓度为x(1)鼠标左键圈住数据,点击做图向导,选择-散点图-,点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点,点击-添加趋势线-,点击-选项-,点击-显示公式--R2-
    1. 以每mg蛋白浓度校正甘油三酯含量。
    说明:
    1. 维生素C>0.18g/L血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、强还原剂二硫苏糖醇、巯基乙醇等会干扰测。高浓度EDTA会干扰测定
    2. 样本即使保存在-20ºC的环境下,甘油三酯也会自发水解。因此建议样品4ºC保存时间应短于24小时,当-70ºC保存时,也应不超过1个月。
    3. 如果室温较低,应延长反应时间或在37ºC进行反应。
    参考文献
    1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
    2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
    加样比例(检测范围20-2000µmol/L
    (可对样品和工作液比例进行微量调整)
      96孔微板测定 1 ml比色杯测定
      空白管 标准品 样品 空白管 标准品 样品
    蒸馏水µl 10       35    
    标准品µl     10       35  
    样品µl      10      35
    工作液µl 190 190 190   665   665  665

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    2. Li S, Meng F, Liao X, et al. Therapeutic role of ursolic acid on ameliorating hepatic steatosis and improving metabolic disorders in high-fat diet-induced non-alcoholic fatty liver disease rats[J]. PLoS One, 2014, 9(1): e86724.
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    6. Hu X, Wang T, Liang S, et al. Antibiotic-induced imbalances in gut microbiota aggravates cholesterol accumulation and liver injuries in rats fed a high-cholesterol diet[J]. Applied microbiology and biotechnology, 2015, 99: 9111-9122.
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    11. Cao X I, Song L N, Zhang Y C, et al. Angiotensinconverting enzyme 2 inhibits endoplasmic reticulum stress–associated pathway to preserve nonalcoholic fatty liver disease[J]. Diabetes/Metabolism Research and Reviews, 2019, 35(4): e3123.
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