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- 2025年12月11日
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事先裁剪和装配好的三明治能节省western 杂交的时间。一张预裁剪好的膜（硝酸纤维或PVDF）和2张厚滤纸 预装配成一个大小适合Criterion 和Criterion XT 凝胶（8.5 x 13.5 cm）或Ready Gel/Mini-PROTEAN 凝胶（7 x 8.5 cm）的印迹膜/滤纸三明治。膜三明治有多种形式：0.2 和0.45 µm 硝酸纤维膜，这是一种经验证的western 杂 交介质；Immun-Blot PVDF 膜，用于高载量免疫印迹； Sequi�Blot PVDF 膜，用于蛋白测序。
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文献和实验免疫印迹所需仪器：电转移装置、电源装置（200v，0.6A）、3MM Whatman 滤纸、2.0或0.45um孔径大小的硝酸纤维素膜(应储存在低温干燥处，操作时应戴手套以免膜被污染。)、塑料袋（Seal—A—Meal）、塑料或玻璃容器（15cm×10cm×2cm）、摇床、浅盘（30cm×15cm×3cm）、磁力搅拌器。操作步骤：准备工作：配制1L转移缓冲液并冷却至4度，冷却装置中加入双蒸水，冰冻过夜。用双蒸水清洗缓冲液池；插入转移电极，在缓冲液池中放入搅拌子，池中加一半缓冲液（约400ml
Tris•HCl pH6.8 20% 甘油 0.01% 溴酚蓝 6.5x电极缓冲液 Tris 7.5g G1y 36 g 双蒸水溶解，定容至500mL，使用时稀释5倍使用 [实验操作] 1.装配做胶用的玻璃板"三明治"： 2.做胶：先配制浓度为12%的分离胶，配方如下： 双蒸水 3.3 mL 1.5mo1/L Tris•HCl (pH 8.8) 2.5 mL
ul 0ul 其次，将以上浓度的标准溶液依次加入96孔板中，每孔加40ul，制作平行孔。之后，将样品上清液用1×PBS稀释50倍（或100倍），混匀，以每孔40ul加入上述96孔板中，制作平行孔。 根据不同浓度BSA在595 nm的不同的紫外光吸光值，用酶标仪测定样品在595 nm处的吸光值，用excel求出一元线性回归方程（y=kx+b），其中y是吸光值，x是测定的样品上清液的浓度，求出
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