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事先裁剪和装配好的三明治能节省western 杂交的时间。一张预裁剪好的膜（硝酸纤维或PVDF）和2张厚滤纸 预装配成一个大小适合Criterion 和Criterion XT 凝胶（8.5 x 13.5 cm）或Ready Gel/Mini-PROTEAN 凝胶（7 x 8.5 cm）的印迹膜/滤纸三明治。膜三明治有多种形式：0.2 和0.45 µm 硝酸纤维膜，这是一种经验证的western 杂 交介质；Immun-Blot PVDF 膜，用于高载量免疫印迹； Sequi�Blot PVDF 膜，用于蛋白测序。
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文献和实验80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V)，以达到更好的浓缩效果，使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳，电泳时间约 2-3 小时。 电转（湿转法） 1） 电泳结束后取出凝胶，在电泳缓冲液中（冷藏的）漂洗数秒。按“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫，再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸），将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上，去除气泡，夹好电
,500- 1000μl/瓶) ，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g，5 min，取上清。 7.电泳分离：上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平， 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解
滤纸，悬挂于室温中，用电吹风充分吹尽溶剂。然后裁去未走过溶剂的滤纸边缘，将滤纸转90°，卷成如前圆筒状，放入盛第二相溶剂的层析缸内展开（操作同上，图3.3），约1小时后溶剂展开到距纸边0.5cm时取出，用电吹风吹尽溶剂使其干燥。 图3.3 纸层析点样、展层示意图 （X, Y分别为原点至斑点中心和溶剂前沿的距离，x为点样原点） 三
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