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    WB 滤纸产品组合

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    WB 滤纸产品组合
    价格: 询价
    品牌: Cytiva 已认证
    免费试用 优质试用报告提升试用成功率
    试用份额:
    30

    试用倒计时:
    xx xx xx xx秒后结束
    试用说明:
    1、运费: 包邮 ; 包邮; 2、联系时间: 试用活动结束后的7天内; 3、申请要求: 每个收件地址(接收人)限申请一份;; 4、其他说明: 收到样品申请后会电话联系,请留意接收来电;
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      在WB 实验转印过程中,膜和滤纸都是一个非常重要的载体。别看他们只是一张纸,可是对于整个实验也是有着举足轻重的关键作用!那么对于各种蛋白,要怎么选择转印方法呢?滤纸和膜,又需要怎么选择呢?(关于膜的选择,请移步:WB转印膜产品组合

      对于大分子量蛋白,建议采用湿转,但是转印速度较慢并需要大量的缓冲液。为了得到清晰、尖锐的条带,获取高质量的转印效果,优先选择湿转,次选半干法转印。在湿转过程中,大量缓冲液会升温,温度升高会导致蛋白质不可逆地变性。因此,使用冷却缓冲液并保持低温非常重要, 许多商品化湿传系统可连接到恒温循环水浴。另一个常见的过程是在4°C环境下进行整个湿转实验,比如在冰箱中。


      ♦ 进行电转时,确保在将凝胶涂敷到膜上时不形成气泡。气泡会导致膜上没有蛋白质转移的空白点。
      ♦ 可使用预冷的转印缓冲液,可避免转印中系统过热。
      ♦ 如果无法确认组装三明治或连接电源是否正确,请预先在凝胶两侧放一张膜,避免丢失蛋白。彩色marker将帮助您确定蛋白转移至哪张膜上!小分子蛋白可穿透转印膜,因此可同时使用两张膜转印小分子蛋白。


      转印缓冲液及转印条件

      转印缓冲液作为导电介质,其中蛋白质是可溶的,它不应影响蛋白质与膜的结合。取决于缓冲液的pH,蛋白转移可以朝向阴极(-)或朝向阳极(+)。此外,分子与膜的结合力受缓冲液特性(如盐类型和浓度)、甲醇浓度以及洗涤剂(如SDS)存在的影响。

      如果转印缓冲液和电泳缓冲液不同,则凝胶在转印之前应放入转印缓冲液中进行平衡,以确保凝胶接触膜之前发生任何膨胀或收缩。该步骤的省略可能导致条带变形或条带分辨率降低。 大多数转印缓冲液中含有甲醇。为了实现蛋白分子与膜,尤其是硝化纤维素膜(6)的有效结合,甲醇的加入是必要的。去除可与蛋白质结合的SDS,可提高分子与膜的结合力。然而,甲醇可能造成凝胶收缩,进而导致蛋白质洗脱率降低。这种效应在大分子量蛋白的转移中更为明显。因此,对于大分子蛋白的转移,建议使用低浓度的甲醇并在转印之前进行较长时间的平衡。

      长期储存后,含有甲醇的缓冲液会变质——在转印之前加入甲醇。

      应选用分析级甲醇,低级甲醇含有金属污染物,污染物将会沉积在电极上。 SDS对蛋白质与膜的结合是不利的,通过平衡15至30分钟,所有剩余的SDS应该在转印之前从凝胶中除去。然而,如果大分子蛋白难溶,或含有过量的疏水性氨基酸,那么需要在转印缓冲液中加入少量的SDS(0.02%至0.1%)。

      如果样品洗脱速率缓慢,则需要较长的转印时间。如果蛋白结合不充分,可尝试不同的缓冲液。   乙醇可以代替甲醇,且更环保。 最广泛使用的蛋白转印缓冲液是经典的Towbin缓冲液。(192mM甘氨酸,25mMTris,20%甲醇[V/V])。
      Towbin和Laemmli缓冲液的pH值通常为8.3左右,不应该用酸或碱来调节。这将导致导电性问题,这会严重破坏实验及损坏设备。


      针对大分子蛋白 (分子量> 10kDa)

      配胶时使用低浓度丙烯Xian An

      从凝胶到膜的蛋白转移可以放缓,如同跑胶时蛋白缓慢迁移。如果转印大分子蛋白,电泳胶需降低聚丙烯Xian 浓度。低密度凝胶很脆弱,须小心处理。

      多一点SDS,少一点甲醇

      大分子蛋白质会沉淀在胶中,提高转印难度。将最终浓度0.1%的SDS添加到转印缓冲液中,将有效避免上述情况。此外,甲醇削弱了SDS与蛋白质之间的相互作用,因此将甲醇减少到10%或更少,将减少蛋白沉淀的风险。

      选择湿转

      ...并且降低转印速度,通过降低电压或电流,增长转印时间。此外,在4°C进行转印有助于缓解产热的影响, 例如凝胶变形。


      针对小分子蛋白 (分子量< 10kDa )

      转印缓冲液中不加SDS

                 SDS阻碍了小分子蛋白与膜的结合

      甲醇浓度控制在20%  

               可去除SDS,并提高转印效率

      监测并优化转印方法

      上述湿转和半干转的标准方法适用于大多数转印实验,如果转印中出现问题,可尝试以下步骤:

      转印缓冲液中加入0.1%的SDS以增强大分子蛋白的溶解度,加入20%的甲醇以增强膜的结合力。

      分两阶段进行转印(仅用于湿转)。在低电流(1mA/cm2)下转印1小时,从而帮助蛋白在膜上的停留时间更长, 可以改善小分子蛋白的结合。为了转移较大分子蛋白,再加第二阶段的较高电流(3.5至7.5mA/cm2)。

      转印后对凝胶进行染色,验证所有蛋白是否完全洗脱。通过预染marker监测到转膜效率。此外,可使用丽春红等可逆染色剂对膜染色进行验证。

      在凝胶的阴极(-)方向放置一张转印膜,以检测组蛋白、核蛋白等带正电的蛋白。此方法需变性胶在无SDS的缓冲液中增加平衡时间,或使用非变性胶,方法仅适用于转膜蛋白的等电点高于缓冲液的pH的情况下。

      放两张转印膜以捕获穿过第一张膜的小分子蛋白 现提供 Cytiva GB005 滤纸和 3MM 滤纸试用,有需要的同学可以联系 Cytiva 店铺申请试用。


      滤纸选购指南如下:
        转印滤纸选择指南  
      品名 3MM 纸 17Chr 纸 GB003 纸 GB005 纸
      厚度 0.34mm 0.92mm 0.8mm 1.5mm
      毛细流速 130mm/30min 190mm/30min
      吸水量 185mg/cm2, 适 中 较大 极大
      推荐应用 全球标准纸用与电泳杂交 半干转印 普通凝胶转印 半干转印
      成像方式   荧光或化学发光胶片或CCD成像仪    



      订购货号:

      Whatman 3MM 印迹滤纸
      3030-866 3MM 滤纸 8*10 英寸 100 张
      3030-704 3MM 滤纸 27cm*100m 1 卷
      3030-681 3MM 滤纸 15cm*100m 1 卷
      3030-675 3MM 滤纸 12.5cm*100m 1 卷
      3030-861 3MM 滤纸 20*20cm 100 张
       3030-917 3MM 滤纸 46*57cm 100 张
      3030-153 3MM 滤纸 15*17.5cm 100 张
      3030-6461 3MM 滤纸 26*41cm 100 张
      3030-6185 3MM 滤纸 11*14cm 100 张
      3030-221 3MM 滤纸 18*34cm 100 张
      3030-6132 3MM 滤纸 12*14cm 100 张
      3030-6189 3MM 滤纸 4*5.25 英寸 100 张

      Whatman 17Chr 印迹滤纸
      3017-915 17Chr 滤纸 46*57cm 100 张
      Whatman GB 印迹滤纸    
      10426981 GB005 滤纸 200*200mm 25 张
      10427818 GB003 滤纸 200*200mm 100 张
      10427813 GB003 滤纸 160*180mm 100 张
      10427812 GB003 滤纸 150*200mm 100 张

       Amersham“ 三明治 ” 印迹膜 / 滤纸组合,每组含 1 张印迹膜与 2 张 3MM 印迹滤纸
       
      10600122 PVDF 0.2μm/3MM 80*90mm 10 张
      10600121 PVDF 0.45μm/3MM 80*90mm 10 张
      10600110 PVDF 0.45μm/3MM 140*160mm 10 张
      10600116 PT 0.1μm/3MM 80*90mm 10 张

       

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    Cytiva(思拓凡)
    • 联系人:

      市场部

    • 所在地区:

      上海市浦东新区华佗路1号

    • 业务范围:

      实验室仪器 / 设备,试剂,细胞库 / 细胞培养,技术服务,耗材

    • 经营模式:

      经销商,生产厂商

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