实时荧光定量PCR检测

实时荧光定量PCR检测 PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'端一3'端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行定量的有力工具。1996年，美国Applied Biosystems公司推出了一种新定量试验技术间实时荧光定量PCR它是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针对PCR产物进行标记跟踪；实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。

实时荧光定量PCR服务内容：
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'端一3'端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

实时荧光定量PCR样品准备条件:
细胞样品：收集细胞后放入液氮中速冻保存或速东24h后转入-80°C冰箱保存；收集细胞后，视细胞量，直接加入1-1.5mL Trizol溶解裂解细胞，再转入-80°C冰箱保存。
组织样品：动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存，液氮冻存24h后可转入-80°C冰箱保存；组织样品同样可以采用Trizol溶解裂解后放入-80°C冰箱保存。特殊组织(植物等)建议采用新鲜组织即刻提取RNA,逆转合成cDNA后-20°C保存备用。所有样品的处理和保存过程中，切总反复冻融。

样品运输条件：样品运输条件根据实验样品的处理条件，可以选择液氮或者干冰运输。