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        流式细胞表面染色步骤

        Elabscience

        4753

        流式细胞表面染色步骤

        一、样本准备

        详见流式细胞样本制备技术流式实验样制备方法及注意事项

        1. 收集细胞,200 目筛网过滤,收集滤液,300 g 离心 5 min,弃上清
        2. 向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS),用移液枪轻轻吹打细胞重悬

        二、细胞计数

        用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后,调整细胞浓度约为 1 × 107/mL

        三、设置实验分组
        流式细胞表面染色步骤

        四、封闭 Fc 受体

        封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。

        小鼠中,纯化的 CD16/CD32 单抗能和 FcγRⅢ/Ⅱ 结合,封闭非特异性染色,使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1 μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体,室温孵育 10 分钟。

        对于人和大鼠,可直接使用过量的,与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源的血清进行阻断,或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。

        五、细胞染色

        1. 按照说明书的推荐用量加入荧光标记抗体,混匀后置于 4℃,避光孵育 30 分钟。
        2. 加入细胞染色 buffer (或含 1%BSA 的 PBS)重悬细胞,300g 离心细胞悬液 5 分钟,弃掉上清。
        3. 加入 200μL 细胞染色buffer(或含 1%BSA 的 PBS)重悬细胞,用流式细胞仪进行检测和分析。

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