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【求助】新手 请问western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗

xungufeng820 各位大侠： 小弟是新手，师兄们也没做过的，不知western-blot测NF-KB、FLT3是用总蛋白提取试剂盒吗？急盼回复！万分感谢！ snowxyh 我用过总蛋白提取试剂盒提蛋白，之后western-blot检测NF-KB，但是感觉这样得到的蛋白浓度很稀，需要比较大的上样量才能检测出来，个人感觉，还是用传统的细胞匀浆裂解，离心提取上清，这样得到的蛋白浓度大，做试验结果好

Western Blot，如何成功优化？

Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法，但是要想得到较好的结果并不容易，只有找到合适的实验条件并进行优化，才能以更少的时间得到更多的结果，达到事半功倍的效果！下面是 R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据：一抗浓度对实验结果的影响抗体：Human/Mouse/Rat RSK1 Antibody (Catalog # AF992)样本：人 HeLa 细胞 (Fig.1)A：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于

western blot注意事项

治底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象 2）书上说出现「微笑」是因为整个胶冷凝的不均匀，中间部分和两端受热不一样而致成了「倒微笑」可能是因为两端的胶凝的不好，加 APS 和 TEMED 后应该混合均匀。 3）样品中盐浓度过高？点样量太多或每孔点样量不均匀？电泳电压不稳定或过高 5、Western-blot 制胶时好多泡泡怎么办？ 1）首先，玻璃板一定要洗干净，用洗洁净洗，冲干净后再用双蒸水冲一，晾干。配胶的时候沿管壁缓缓加入各个成分，混匀的时候用手轻轻摇匀，如果用枪