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文献和实验(casamino acids, BSA, serum), and decreasing the amount of protein applied to the electrophoresis gel.• Occurrences of extra bands in the blot can be resolved by several strategies. Run a control blot omitting the primary antibody to determine
Troubleshooting Guide: Western Blot
Troubleshooting Guide: Western Blot Problem: Poor Transfer Possible Source Test or Action Membrane does not wet uniformly Pre-wet membrane in 100% methanol
蛋白条带对应的分子量大小)、空白载体对照(如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照)、已知量标准产物的正对照,另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因,国内的不少人做Western Blot往往省略参照,导致结果出现问题时无法分析结果,即便有结果也可能影响结果的分析。 内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照
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