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- TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片断与T载体DNA连接起来的方法。
- 2026年02月02日
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TSINGKE
- 服务名称：
TA克隆
TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片断与T载体DNA连接起来的方法。 通过PCR的方法扩增目的基因片断，往往由于缺失或其他原因无法获得准确的DNA序列，通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，使用通用引物测出准确DNA序列。 由于在PCR过程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分为2种情况：
（1）使用Taq酶，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。
（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上A，得到的DNA序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加A的过程，通常是以PCR回收产物为模板，加上一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分钟，然后将加A产物直接用于TA连接。
实验流程
您需要提供的信息
写明需克隆片段的信息：样品名称，片段大小，是否纯化，产物是否带有“A”尾。送样要求
| 样品类型 | 片段长度（bp） | 浓度 | 体积 |
| PCR已纯化 | 100～3000 | ≥10 ng/ul | ≥10 ul |
| PCR未纯化 | 100～3000 | ≥30 ng/ul | ≥30 ul |
我们可以提供的服务
1.PCR产物鉴定及纯化。2.使用我们公司pClone007 Vector Kit进行克隆。
3.测序及结果分析。
结果展示
服务价格
| 项目内容 | 价格 |
| TA克隆 | 300元/样本 |
| 测序 | 同常规测序 |
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3.测序及结果分析。
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文献和实验PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接) 【实验目的】 1.掌握DNA回收和连接的基本原理。 2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。 【实验
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara；可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体，不仅连接时间也很长，而且做不到
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于极小的PCR产物进行克隆，很可能因为PCR产物严重过量，导致无菌落或菌落极少。 白色
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
