Small RNA测序

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  • 2025年12月08日
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    产品简介
    Small RNA是生物体内一类序列长度在18~30bp,对生命活动具有重要调控作用的RNA分子,主要包括miRNA、siRNA和piRNA,一般通过与靶向mRNA特异性结合来调控靶mRNA的表达,从而在生物体的细胞生长、分化、个体发育、疾病发生以及靶向药物研究等起着重要的调控作用。小RNA测序是利用高通量测序技术对小RNA进行检测,能快速鉴定并定量不同组织、不同发育阶段、不同胁迫条件下已知和未知的小RNA的表达及其靶标mRNA,为研究small RNA功能及调控机制提供有力手段。

    产品优势
    通量高:一次测序得到数百万条以上的序列;
    分辨率高:可以检测小RNA 单个碱基的差异;
    精准度高:从几个到数十万个拷贝精确计数; 快速全面鉴定和预测各种类型的Small RNA及靶基因;
    项目经验丰富,实验流程和生信分析流程成熟,数据可靠。


    技术路线
    Small RNA测序

    结果展示
    small RNA分类注释
    将Clean Reads分别与Silva数据库、GtRNAdb数据库、Rfam数据库和Repbase数据库进行序列比对,过滤rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA等ncRNA以及重复序列,获得包含miRNA的未注释的 reads,将未注释的reads与参考基因组进行序列比对,将比对上的reads进行已知及新的miRNA鉴定。
    Small RNA测序
    miRNA表达量分析
    各样品中miRNA表达量总体分布图能反映样品中miRNA的整体表达水平。
    Small RNA测序
    差异表达miRNA聚类分析
    在不同实验条件下筛选差异miRNA,通过将表达模式相同或相近的miRNA聚集成类,从而识别未知和已知miRNA的的调控功能。
    Small RNA测序
    差异miRNA维恩图分析
    不同差异组合之间差异miRNA韦恩图可以直观地显示出不同比较组之间共同的和特有的差异表达miRNA的个数,从而解析不同处理组miRNA调控机制,如果只有两个样品时,则只进行两个样本之间的韦恩图绘制。
    Small RNA测序
    差异miRNA靶基因GO富集分析
    通过对差异表达miRNA靶基因进行GO富集分析,研究miRNA调控靶基因在生物过程(biological process)、 细胞组分(cellular component)和分子功能(molecular function)的富集及其功能。
    Small RNA测序
    差异miRNA靶基因KEGG富集分析
    差异miRNA靶基因KEGG富集程度通过Rich factor、Qvalue和富集到此通路上的基因个数来衡量。enrichment factor越大,表示富集的程度越大。Qvalue值越接近于零,表示富集越显著。挑选富集前20位的pathway条目在图中展示,有助于解析miRNA调控靶基因功能。
    Small RNA测序


    常见问题 
    1、Q:Small RNA测序物种适用范围是什么?    
    A:大部分Small RNA来源于基因间区,适用于有参考基因组或有转录组信息的物种。

    2、Q:miRNA测序一般推荐数据量?    
    A:普通二倍体物种一般推荐10M,多倍体物种可以测20M。

    3、Q:预测的新miRNA和siRNA如何区分?    
    A:miRNA和siRNA前体序列特征不同:miRNA前提要求可形成发卡结构,而siRNA无此特征,因为可以通过这个区别来区分miRNA和siRNA。

    4、Q:miRNA靶基因验证方法有哪些?    
    A:(1)利用qPCR 验证测序结果       (2)采用 Northern 杂交,FISH 等方法,进一步证实候选基因的差异表达和细胞内定位。       (3)后续开展候选基因功能验证,主要通过体内体外的功能缺失或功能获得证实候选基因与表型的相 关性,包括 RIP,RNA pull-down,Dual-Luciferase Reporter 等实验手段,直接验证 miRNA 与mRNA的调控机制。





     

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