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上海生博生物医药科技有限公司
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RNA干扰载体shRNA质粒构建
生博采用U6或H1启动子的shRNA表达载体，可以在细胞内直接转录出siRNA，行使其RNAi功能，GFP可以监测转染效率，抗性基因可以用于药物压力下细胞稳定株筛选，能够解决siRNA干扰时间短的缺点。同时提供用于RNA干扰实验的腺病毒载体 (Adenoviral vector)和慢病毒载体(Lentiviral vector)病毒型载体构建服务。我们根据客户提供的基因ID设计3到4个siRNA靶点并安排引物合成。把单链的引物退火成双链oligo序列，连接入双酶切线性化的RNA干扰载体，测序验证正确的shRNA干扰载体，进行高纯度质粒抽提。shRNA干扰载体后续可以进行转染实验，病毒包装实验，稳定株筛选实验等。
服务流程图
参考文献
[1] SUi G,Soohoo C,Affar el B,et al. A DNA vector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells.Proc.Natl Acad Sci USA,2002, 99(8):5515-5520.
[2] PAddison PJ,Caudy AA,Hannon GJ. Stable suppression of gene expression by RNAi in mammalian cells[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(3):1443-1448.
[3] BRummelkamp TR,Bernards R,Agami R. A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells[J].Science,2002,296(5567):550-553.
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文献和实验) and short hairpin RNAs (shRNAs) has become a valuable genetic tool. Here, we report the construction and application of a shRNA expression library targeting 9,610 human and 5,563 mouse genes. This library is presently composed of about 28,000 sequence
产品技术背景 pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形成有2个U突出末端的成熟siRNA。由于H1启动子对转录产物长度的严格限制，基本上杜绝了非特异性干扰片段的产生，将载体转染细胞后对其它基因的影响降到最低。 pRI系列载体已经成功用于多种
【1】 pSUPER vector http://www.oligoengine.com/pSUPER_New/pSUPER_Main2.html 【2】 pSilencer http://www.ambion.com/catalog/ProdGrps.html?fkApp=25&fkSubApp=145 【3】 psiRNA VECTOR http://www.invivogen.com/siRNA/psiRNA.htm 【4】 pGE-1 http://www
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