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- 过表达、干扰与敲除慢病毒
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- 2026年01月29日
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慢病毒包装
【服务介绍】
慢病毒（Lentivirus）是一种基于 HIV-1 改造的逆转录病毒载体，可将外源基因或干扰序列稳定整合至宿主染色体，实现长期稳定表达，并能高效感染分裂和非分裂细胞，广泛用于多种难转染细胞的基因过表达、基因沉默和基因编辑研究。
擎科生物提供从序列设计到慢病毒包装及稳转细胞系构建的一站式服务，体系成熟稳定、滴度和纯度可靠，交付周期快，最快可在 15 天内完成。
【服务类型】
1. 过表达慢病毒
根据客户提供的基因信息，合成目的基因的cDNA序列，并将其连接到慢病毒载体上，通过包装获得目的基因的过表达慢病毒。
2. 干扰慢病毒
（1）五保二干扰慢病毒
根据客户提供的基因信息，设计并合成5条针对目的基因的shRNA模板，分别连接到慢病毒载体上，通过包装获得5个干扰目的基因的慢病毒株，以此达到确保至少2条能够达到有效干扰目的基因表达的目的。包装完成后提供全部5种干扰慢病毒。
（2）三保一干扰慢病毒
根据客户提供的基因信息，设计并合成3条针对目的基因的shRNA模板，分别连接到慢病毒载体上，通过包装获得3个干扰目的基因的慢病毒株，以此达到确保至少1条能够达到有效干扰目的基因表达的目的。包装完成后提供全部3种干扰慢病毒。
（3）单靶点干扰慢病毒
根据客户提供的基因信息和确定的干扰序列，设计和合成1条针对干扰序列的shRNA模板并将其连接到慢病毒载体上，通过包装获得目的基因的干扰慢病毒。
3. 敲除慢病毒
利用sgRNA识别靶基因序列，核酸内切酶Cas9切断靶基因后细胞会通过NHEJ机制在断裂处结合，结合过程中随机插入N碱基，若插入的N碱基数恰好不是3的倍数，则目的基因发生移码突变，实现基因敲除。与RNA 干扰相比不同之处在于，Cas9 是从基因组水平对基因进行敲除，让靶蛋白完全失活。
（1）三保一敲除慢病毒
根据客户提供的基因信息，设计并合成 3 条针对靶基因的 sgRNA 序列，分别连接至慢病毒载体并完成病毒包装，获得 3 个用于基因敲除的慢病毒株。以此达到确保至少1条sgRNA 具备有效切割能力。包装完成后提供全部 3 种敲除慢病毒。
（2）单靶点敲除慢病毒
根据客户提供的基因信息及指定的 sgRNA 序列，构建载有单条 sgRNA 的敲除型慢病毒载体，并通过包装获得用于靶基因敲除的慢病毒。
**注：**可选择Cas9和sgRNA是否在同一骨架上，但Cas9蛋白基因序列长达4 kb，为保证病毒滴度，建议选择Cas9和sgRNA分开包装。
【服务优势】
· 高滴度: 高效慢病毒包装系统，滴度≥ 1 × 10⁸ TU/mL
· 高纯度: 采用超速离心过滤，高纯度、低残留，可达in vivo级
· 超快速: 基因合成 + 病毒包装快至15天交付
【服务流程】
【交付内容】
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服务项目 |
交付内容 |
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过表达慢病毒 |
慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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实验报告1份 |
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五保二干扰 |
不同位点干扰慢病毒各5支，共25支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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实验报告1份 |
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三保一干扰 |
不同位点干扰慢病毒各5支，共15支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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实验报告1份 |
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单靶点干扰 |
干扰慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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实验报告1份 |
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三保一敲除慢病毒 |
不同位点敲除慢病毒各5支，共15支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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实验报告1份 |
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单靶点敲除慢病毒 |
敲除慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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实验报告1份 |
【注意事项】
1. 存储条件及期限：为了避免反复冻融，我公司已对病毒进行分装，收到后请直接置于-80℃冰箱保存；使用病毒时，取出置于4℃融化后进行细胞感染。
2. 慢病毒稀释：我公司提供的慢病毒滴度均在1×108 TU/mL以上，当需要稀释慢病毒滴度时，请从-80℃冰箱取出适量病毒，置于4℃融化后，用无血清的细胞基础培养基或1×PBS（无Ca2+/Mg2+ ）稀释至合适滴度后进行细胞感染实验，稀释后的病毒4℃保存（请尽量在3天内用完)，不建议进行分装冻存。
3. 反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%~20%左右；因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
4. 避免不利的环境因素对病毒活力的影响，包括不合适的pH值（合适pH值在7.2左右），较高的温度、有机溶剂、蛋白变性剂、表面活性剂、阳离子螯合剂如EDTA等。
5. 避免吹打或剧烈振荡病毒液，因产生气泡易使病毒侵染力下降。
6. 注意病毒液不能过0.22 µm滤膜，该处理会将导致滴度大幅下降。
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文献和实验IGF2BP2 promotes colorectal cancer progression by upregulating the expression of TFRC and enhancing iron metabolism. Biology Direct, 2023. (IF: 5.5002) .
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