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- 2026年01月17日
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概要
qPCR Master Mix is a 2X concentrated solution optimized for TaqMan® probe-based, real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR). It is intended for use in combination with gene-specific primers (to amplify target cDNA) and fluorogenic-labeled probes that use the 5’ nuclease activity of Taq DNA polymerase to produce a fluorescent signal. The rate of accumulation of the fluorescent signal is used to quantify the cDNA, and thereby to determine the amount of mRNA present in the original sample. qPCR Master Mix includes a Hot Start DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, enhancers, and stabilizers. The qPCR Master Mix Kit also includes ROX Reference Dye as a separate component, making it compatible with both reference dye-dependent and -independent qPCR systems.• Efficient, sensitive, and reproducible
• Optimal performance when using standard or fast cycling conditions
• Ideal for high-throughput applications and overnight experiments
• Compatible with various real-time qPCR instruments
Components:
qPCR Master Mix Kit (1 mL)
• qPCR Master Mix, 1 mL
• ROX Reference Dye, 200 µL
qPCR Master Mix Kit (5 mL)
• qPCR Master Mix, 5 mL
• ROX Reference Dye, 200 µL
Cell Type:
脂肪细胞; 软骨细胞; PSC衍生内胚层; 肝实质细胞; 肠细胞; 间充质干细胞和祖细胞; 成骨细胞; 胰腺细胞; 多能干细胞
Species:
人
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文献和实验几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
成功做完了逆转录，这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多，即使使用了 qPCR 预混液，也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列（Q411 /Q421 /Q431 /Q441）提供不同颜色的试剂，利用移液过程中的变色效应，追踪移液过程，可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时，引物设计需遵循以下原则：引物长度 18～25bp，产物长度 80～300bp，GC 含量 40～60
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
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