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IntestiCult™人肠类
企业认证
(A)IntestiCult™ OGM中生长的类器官主要是囊泡状的。(B)当切换到IntestiCult™ ODM时,类器官上皮增厚,并具有明显的出芽,表明更多的分化状态。类器官分别在扩增或分化的第5天进行成像。
图2. 肠类器官在IntestiCult™ ODM中分化后含有较高比例的成熟细胞类型
(A,B)在IntestiCult™ OGM中生长的类器官富含Ki-67+增殖细胞(A),同时含有很少的分化细胞类型,如杯状细胞(MUC2,A)、肠上皮细胞(KRT20,B)和肠内分泌细胞(CHGA,B)。(C、D)当切换到IntestiCult™ ODM时,类器官中含有少量Ki-67+增殖细胞(C,箭头),杯状细胞(MUC2, C)、肠上皮细胞(KRT20,D)和肠内分泌细胞(CHGA,D,箭头所指处)的比例更高。
图3. 使用IntestiCult™ ODM对气液界面(ALI)的肠上皮体系进行分化
(A - E)将类器官来源的单层体系使用ALI的方式培养,可以促进肠上皮培养物的进一步分化,使用RT-qPCR检测基因表达水平。每个标记的相对定量(RQ)是相对于actB和TBP管家基因显示的,并且相对于在IntestiCult OGM(人)中生长的未分化的类器官进行了标准化。在浸没培养和ALI培养的单层体系中,祖细胞标记物(A)Lgr5和(B)Axin2的表达量显著下降,而肠上皮胞(KRT20,C)、杯状细胞(MUC2,D)和肠内分泌细胞(CHGA,E)显著上调。在ALI单层培养体系中,Axin2进一步减少,KRT20、MUC2和CHGA的表达增加。(F,G)比较在IntestiCult™ ODM中生长的类器官单层的横截面,作为(F)淹没或(G)ALI的培养体系显示了肠上皮细胞的进一步分化与杯状细胞和细胞外粘液(MUC2,绿色)的比例增加。
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